提供蛋白质谱鉴定服务

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更新: 2021-05-30
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服务名称: 蛋白质谱鉴定
提供商: 上海中科新生命生物科技有限公司
方法一、利用MALDI-TOF-TOF质谱仪 。 仪器:ABI4800 MALDI-TOF/TOF。优点:速度快,通量高,方法简便。缺点:灵敏度不足,可检测到的肽段少,对数据库检索是不利的。 肽段分子量精确度往往不够理想,影响鉴定结果。肽段分子质量在2000以上时,在MALDI-TOF-MS中的分辨率会有所下降。蛋白质数据库仍不完善。
二、利用ESI-MS质谱仪。仪器:Thomer LTQ-VELOS。优点:通过串联质谱大大增加了蛋白质鉴定的准确性。对图谱的精确度和分辨率要求不如PMF高。采用纳升喷雾提高检测的灵敏度。 缺点:通量与速度不如MALDI。数据库检索比较费时。
样品要求: 1、防止角蛋白污染 2、样品状态:液体、固体或胶内蛋白质(接受考马斯亮兰染色和银染样品鉴定) 3、含盐量: 挥发性无机盐< 20 mM; 不挥发性无机盐< 5mM 4、不少于200 ug /一块胶(银染); 5、胶内蛋白质鉴定,蛋白质样品量不少于1mg/一块胶(考马斯亮兰染色)
蛋白质鉴定结果常见问题: 1、由于角蛋白等蛋白质的污染,造成鉴定为污染蛋白。 2、由于蛋白量过少引起鉴定结果的评分低,可信度不高。 3、由于蛋白质纯度不足,造成鉴定结果为混合蛋白质。 4、由于蛋白质为未知蛋白,造成鉴定无结果。
注意事项: 1、推荐采用考马斯亮兰染色。因为该方法的成功率较高,而银染的成功率则会低很多。 2、银染的方法为快速银染法。常规银染法不适用质谱鉴定。 3、考马斯亮蓝染色样品的上样量>1mg 4、银染法得上样量>0.6mg
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