iTRAQ蛋白组学_RNA分离扩增_分子生物学服务_技术服务库_商城

同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ)概述
同位素标记相对和绝对定量(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation, iTRAQ)技术的发展得益于可进行多重标记的iTRAQ试剂的开发，该试剂结构由指示基团、中性平衡基团和反应基团三部分组成。不同指示基团及其相对应平衡基团的质量和都相同，而反应基团能与赖氨酸ε氨基和所有肽链的氨基末端连接，可标记所有氨基酸。不同标记试剂与来源于不同样品胰酶消化后的肽段结合，经过色谱分离，并通过一级质谱和二级质谱。平衡基团在二级质谱时发生中性丢失，而报告基团在二级质谱低质量区域产生多个报告离子，其信号强度分别代表该标记样品的表达量，根据报告离子的峰面积计算同一蛋白质同一肽段在不同样品间的比值，从而实现蛋白的相对和绝对定量。
能够得到：一般500至600种蛋白，以及不同样品间蛋白质表达的差异。

应用：
£ 可同时标记2~8个样品，一次实验实现多达8个样品的蛋白质鉴定和定量

非常高的通量

£ iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白，还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。

可以进行多个时间点蛋白质组动态变化的监测
可以分析详细分期／型的临床疾病样本，并可设计样本重复
甚至可以进行个体样本的研究
细胞周期、细胞信号传导整个过程的蛋白质组动态学

相比其他蛋白组分析：

蛋白质组分析技术	缺点
2D-PAGE	对分子量多大或者过小（>200000或者<8000）的蛋白质、低丰度蛋白质、极碱或者疏水蛋白质性难于分离。
DIGE	对分子量多大或者过小（>200000或者<8000）的蛋白质、低丰度蛋白质、极碱或者疏水蛋白质性难于分离。
ICAT	功能重要的不含半胱氨酸的蛋白质会被遗失；亲和层析可能导致污染