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份 库存999份
| 提供商： | 云南临康生物 |
| 服务名称： | 随机扩增多态性DNA（RAPD）分析服务 |
试剂、试剂盒：寡核苷酸引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶、PCR缓冲液、矿物油、电泳所需试剂
仪器、耗材：PCR仪、电泳装置、微量离心机、微量移液器、Eppendorf管、凝胶成像系统
一、 实验条件
1. 药品试剂
（1）模板DNA（10～100 ng）
（2）寡核苷酸引物（20 mmol/L贮存液，可向Operon Technologies或Perkin Elmer公司购买，也可以自己合成）
（3）0.2 mmol/L dNTPs（必须使用高质量的dNTPs，这一点非常重要。dNTPs经反复化冻后会发生降解，因此应分成小份保存。应注意混合物中四种dNTP的量要相等）
（4）Taq DNA聚合酶（Perkin Elmer，Norwalk，Connecticut）
（5）10×PCR缓冲液（500 mmol/L KCl，15 mmol/L MgCl2，100 mmol/L Tris HCl，pH 8.3）
（6）矿物油
（7）电泳所需试剂
2. 仪器设备
PCR扩增仪、电泳装置、微量离心机、微量移液器（1～20 ml和20～200 ml）、0.5 ml Eppendorf管、紫外线观察装置及照相设备。
二、 操作程序
1. 在冰里向无菌的Eppendorf管中加入以下反应物：
水： 14.75 ml
10×缓冲液： 2 ml
10×dNTPs：2 ml
引物（20 mmol/L）：0.2 ml
Taq DNA聚合酶
终体积
DNA（10～100ng）：1 ml
石蜡油 ：20 ml
2. 93℃反应2 min后开始如下循环：
93℃变性反应：1 min
36℃退火反应：1 min
72℃延伸反应：1.5 min
经过45个循环后，最后一个循环72℃增加5 min，循环结束后反应产物置于4℃保存。
3. 20 ml反应产物走凝胶电泳，经溴化乙锭染色检测扩增的情况。
通过盘龙区市场监督管理局认证 
