慢病毒/腺病毒包装

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更新: 2021-04-27
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提供商: 上海若谷生物
服务名称: 慢病毒/腺病毒包装
慢病毒(Lent Virus,LV)是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体,是逆转录病毒的一种。慢病毒通过顺式作用元件将病毒运送到细胞核,并将要表达的基因序列整合到细胞的基因组中,是理想的可以在多种细胞类型(如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞和非分裂细胞)中实现可重复的稳定表达的基因表达工具,具有广阔的应用前景。
腺病毒(Adeno Virus,AV)是一种没有包膜的线状双链DNA,它能感染分裂细胞和非分裂细胞,存在多种AV血清型。通过转基因的方法取代E1或E3基因,降低病毒的复制能力,这些重组病毒仅在表达高水平E1和E3基因的细胞中复制,因此适合应用于治疗的高效控制系统。腺病毒载体能够高效传递和表达基因的能力(尤其是在体外),对于难转染的细胞,如原代或非分裂细胞,采用病毒递送miRNA/shRNA的方式是非常有效的选择。
 
腺病毒载体系统和慢病毒载体系统比较
病毒表达系统 腺病毒表达系统(Adenovirus) 慢病毒表达系统(Lentivirus)
病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒
复制 自主复制 自主复制
是否整合 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因
感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞 感染分裂和不分裂细胞,适合难转染的原代细胞(如神经细胞,淋巴细胞)及体内实验
表达丰度 高水平表达 中水平表达
表达时间 快(1-2 天) 慢 (1-3天 )
滴度 滴度高达1011pfu/ml 滴度最高可达108 pfU/ml
克隆容量 可插入高达8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低 可插入不超过8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低
免疫原性 高免疫原性 低免疫原性
 
 
服务内容
1、构建和纯化含有外源目的基因的相关病毒表达载体
2、转染相关病毒包装的细胞系,培养后收集上清制备病毒粗提液
3、病毒纯化、浓缩
4、测定病毒滴度
5、可分析重组目的蛋白的表达情况
 
样本要求
1、需提供含有目标基因的质粒或所要表达的目的基因的名称,序列;质粒请提供测序图谱,如果需我们测序,请告知。
2、请告知需要的病毒滴度及总量,病毒是否需要纯化。
3、若需要检测外源基因的表达,请提供相应的抗体。
4、请告知目的基因有无细胞毒性,是否需要构建对照病毒。
5、请告知用于细胞实验还是动物实验,需要感染的细胞类型或动物模型类型。
 
结果及数据提供
提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的病毒储存液,实验数据及报告。