提供商: | 上海维景 |
服务名称: | ChIP染色质免疫共沉淀实验代做 |
2. PCR引物设计一般退火温度要相近,分别位于基因组上靶序列上下游各50~150bp左右,最好使靶序列位于PCR产物链的中间位置。正如上面这位同仁所说,PCR产物不能太大(<250bp)。最重要的就是要先用genome DNA和Input验证过,这对引物在PCR体系是能够扩出条带的。另外就是因为Chip得到的产物会比较少,所以一般PCR的循环数要有保证,一般都在30个循环以上(35~45,根据具体结合能力而定)。
3. 关于PCR,要注意的是,扩增片段不能太长,一般应小于200bp,因为基因组经超声处理后会断裂成比较小的片段(200到500bp)。