酶联免疫吸附（ELISA）实验_抗体标记_免疫学服务_技术服务库_商城

提供商：	晶莱生物
服务名称：	酶联免疫吸附（EliSA）实验
规格：	96T/48T

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ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

实验步骤
一、包被抗原

1. 用50mM 的碳酸盐包被缓冲液（pH 9.6）溶解抗原，使抗原浓度为10-20 μg/ml，加100 μl/孔到96 孔酶标板，4℃放置过夜。
2. 第二天弃去包被液后，用PBST 洗涤3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封闭1 小时。
3. PBST 洗涤3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37℃孵育2 小时。
4. PBST 洗涤5 次后，加入100μl 稀释后的HRP 标记的二抗，37℃孵育1 小时。
5. PBST 洗涤5 次后，显色剂显色20 min 后，酶标仪上读取A405 吸收值。

二、包被细胞

1. 在96 孔培养板上接种细胞数为1 x 104 cells/well，37℃过夜培养。
2. 第二天用PBS 洗涤培养板2-3 次。
3. 加入125 μl/well 10% Forma lin（1:10 稀释）, 室温下固定15 min。
4. 用ddH2O 洗涤培养板3 次，并晾干，储藏在2-8℃备用。
5. 用PBST 洗涤3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封闭1 小时。
6. PBST 洗涤3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37℃孵育2 小时。
7. PBST 洗涤5 次后，加入100 μl 稀释后的HRP 标记的二抗,37℃孵育1 小时。
8. PBST 洗涤5 次后，显色剂显色20 min 后，酶标仪上读取A405 吸收值。50mM 的碳酸盐包被缓冲液：0.05mol/L pH9.6 碳酸缓冲液,4℃，保存,Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸馏水稀释至100 ml。

ABTS 作为底物进行显色反应(10ml)：
² 0.2M Na2HPO4 2.4ml
² 0.1M 柠檬酸2.6ml
² ddH2O 5ml
² ABTS 5mg
² H2O2(30%) 4 ul（用前加入）

收费标准/服务周期/提供结果：
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