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提供商：	晶莱生物
服务名称：	免疫荧光染色实验服务
规格：	切片

一、制片

选无自发性荧光的石英玻片或普通优质玻片，洗净后浸泡于无水乙醇和乙氧基乙烷等量混合液中。用时取出用绸布擦净。将待检样品如组织块剪成适当大小印压于玻片上。也可采用冰冻切片或石蜡切片样品。

二、固定

除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外，一般均应固定。
固定的作用有三：
1. 防止标本从玻片上脱落。
2. 除去防碍抗原-抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果。
3. 固定的标本易于保存，如组织切片固定后在-20℃下可保存一年而不改变其染色特性。

标本的固定原则是：
1. 不能损伤细胞内的抗原。
2. 不能凝集蛋白质。
3. 不能损伤细胞形态。
4. 固定后应保持细胞膜的通透性，以允许抗体进入与抗原结合。

三、水洗

固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡冲洗，最后以蒸馏水冲洗，防止自发性荧光。

四、染色

染色分直接染色法与间接染色法。

1. 材料与试剂

（1）荧光抗体，稀释至应用浓度。

（2）0.01 Mol/L pH7.4PBS液

（3）9份优质甘油加1份pH7.4PBS液即为甘油缓冲液。甘油有减少非特异性荧光的作用。

（4）带盖方盘

2. 直接染色法

（1）将固定好的玻片置于湿盘中，滴加荧光抗体染色液，以覆盖为度，加盖，37℃感做30 min~45min。

（2）PBS冲洗3次，每次冲洗3 min，即3×3冲洗。

（3）蒸馏水冲洗。

（4）滴甘油缓冲液一滴，封片，荧光显微镜检查。

3. 间接染色法

（1）检查抗原：
①取固定标本，加已知的免疫血清，37℃孵育30 min。
②以PBS液3×3冲洗。
③再加荧光标记的抗抗体，37℃孵育30 min。
④PBS 3×3冲洗。
⑤H₂O冲洗，凉干。
⑥加甘油缓冲液，封片、镜检。

（2）检查抗体：
  ①免疫后动物的淋巴组织涂片，自然干燥，甲醇固定。
②滴加相应抗原液（按1：100~1：500稀释），37℃孵育30 min。
  ③PBS液3×3冲洗。
④加荧光抗体，37℃孵育30 min。
  ⑤PBS液3×3冲洗。
  ⑥水洗，凉干。
            ⑦加甘油缓冲液，封片、镜检。

晶莱生物病理类实验服务总览表

类别	服务项目	备注	说明
制片前处理	石蜡包埋	包埋1块	固定后组织按客户要求取材，脱水，包埋成蜡块（进口石蜡）
	特殊包埋（细胞、材料、眼球等）	包埋1块	包埋要求难度较高(含特殊位置取材)
	石蜡组织芯片	阵列点位包埋	客户提供供体蜡块及标本信息
	软化（肝硬化、皮肤结痂、植物等）	1块标本软化	较为坚硬组织软化处理
	骨组织脱钙（小）	1块标本脱钙	最大面≤2cm²骨组织脱钙
	骨组织脱钙（大）	1块标本脱钙	最大面＞2cm²骨组织脱钙
	骨组织EDTA脱钙（小）	1块标本脱钙	最大面≤2cm²骨组织EDTA脱钙
	骨组织EDTA脱钙（大）	1块标本脱钙	最大面＞2cm²骨组织EDTA脱钙
	石蜡白片	石蜡白片1片	组织防脱载玻片石蜡白片
	冰冻组织制备	冰冻包埋及前处理	4%多聚甲醛固定的组织或OCT包裹的新鲜组织（-80℃或液氮内保存，干冰运输）
	冰冻切片	冰冻组织切片1片	同一组织连续切片3张以上免制备费
染色	HE染色	染色含切片	苏木精-伊红染色法，观察组织形态
	油红O染色	染色含冰冻切片	4%多聚甲醛固定，冰冻切片。对组织内脂质（如脂滴）染色
	番红O固绿染色	染色含切片	常用于植物、软骨组织形态染色
	Masson染色	染色含切片	观察组织纤维化和肌纤维的鉴别及组织纤维化程度
	天狼猩红染色	染色含切片	观察组织纤维化程度，及偏振光进行胶原亚型的分区
	PAS糖原染色	染色含切片	观察肝脏、肌肉等组织内糖原的变化；肠胃肺支气管等杯状细胞酸性粘液物质变化
	阿利新蓝染色	染色含切片	常用于软骨组织或早幼粒细胞、巨核细胞染色
	甲苯胺蓝染色	染色含切片	观察软骨组织形态或组织内肥大细胞的数量及分布
	尼氏染色	染色含切片	观察脑或脊髓等中枢神经系统内神经元尼氏体的变化
	LFB髓鞘染色	染色含切片	观察神经髓鞘的形态及变化
	普鲁士蓝染色	染色含切片	常用于吞噬细胞内铁粒子的含量和定位
	VG染色	染色含切片	显示组织胶原纤维及肌纤维的形态及变化
	EVG染色	染色含切片	观察血管弹性纤维的形态及变化
	VonKossa染色	染色含切片	观察组织内病理性钙沉积情况
	刚果红染色	染色含切片	一般用于组织淀粉样变染色
	维多利亚蓝染色	染色含切片	用于弹力纤维染色
免疫组化	免疫组化预式	染色含切片	试两个一抗浓度后拍照
	免疫组化正式	染色含切片	客户提供一抗，常用二抗公司提供
	免疫组化芯片	染色含切片	免疫组化组织芯片染色
	免疫荧光（石蜡-单标）	染色含切片和拍照	需实验前商定拍照倍数及视野
	免疫荧光（石蜡-双标）	染色含切片和拍照	需实验前商定拍照倍数及视野
	免疫荧光（冰冻-单标）	染色含冰冻切片和拍照	需实验前商定拍照倍数及视野
	免疫荧光（冰冻-双标）	染色含冰冻切片和拍照	需实验前商定拍照倍数及视野
	抗体代购		详情请咨询工作人员
Tunel	Tunel(POD自带试剂盒)	染色含切片	细胞凋亡染色，客户需提供Tunel试剂盒
	Tunel(公司提供试剂盒)	染色含切片	细胞凋亡染色，公司提供罗氏POD Tunel试剂盒
	凋亡试剂盒代购	染色含切片	详情请咨询工作人员

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