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免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档，已成为研究蛋白质相互作用的经典方法。
二、实验原理
当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的很多蛋白质-蛋白质见的相互作用被保留下来。如果以细胞中某蛋白质为抗原，加入相应抗体，那么该抗体就能与抗原，以及与该抗原具有相互作用的蛋白质之间形成免疫复合物，一起沉淀下来。经过SDS-PAGE电泳，western blot和（或）质谱可鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。
三、实验流程
1. 用预冷的PBS洗涤细胞两次，最后一次吸干PBS；
2. 按比例加入适量预冷的RIPA 缓冲液；
3. 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下，把悬液转到1.5EP管中，4°C，缓慢晃动（EP管插冰上，置水平摇床上）；
4. 4°C离心后，立即将上清转移到一个新的离心管中；
5. 准备Protein A agarose，用PBS 洗两遍珠子，然后用PBS配制成50%浓度，建议减掉枪尖部分，避免在涉及琼脂糖珠的操作中破坏琼脂糖珠；
6. 按比例加入Protein A琼脂糖珠（50%），4℃摇晃10min（EP管插冰上，置水平摇床上），以去除非特异性杂蛋白，降低背景；
7. 4°C离心后，将上清转移到一个新的离心管中，去除Protein A珠子；
8.用BCA法测定蛋白浓度，测前将总蛋白至少稀释1：10倍以上，以减少细胞裂解液中去垢剂的影响（定量，分装后，可以在-20℃保存一个月）；
9. 用PBS将总蛋白稀释到合适浓度；
10. 加入一定体积的预先稀释的一抗；
11.4°C缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温2h，激酶或磷酸酯酶活性分析建议用2 h室温孵育；
12.加入Protein A琼脂糖珠来捕捉抗原抗体复合物，4°C缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温1h；
13.瞬时离心5s，收集琼脂糖珠-抗原抗体复合物，去上清，用预冷的洗液（或PBS）洗3遍；
14.将上样样品煮5min，以游离抗原，抗体，珠子，离心，将上清电泳，收集剩余琼脂糖珠，上清也可以暂时冻-20℃，留待以后电泳，电泳前应再次煮5min变性。
注意事项：
1.每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质相互作用。多采用非离子变性剂（NP40 或Triton X-100)；不能用高浓度的变性剂（0.2％SDS）；细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的 cocktailer。
2.确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的，而并非外源非特异蛋白，单克隆抗体的使用有助于避免污染的发生；
3.要确保抗体的特异性，即在不表达抗原的细胞溶解物中添加抗体后不会引起共沉淀；
4.确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中，而不是由于细胞的溶解才发生的，这需要进行蛋白质的定位来确定。
四、服务说明
1.客户提供：
新鲜的样本材料（组织、细胞或蛋白溶液）；用于免疫沉淀的一抗（或由我司代购）及待测蛋白的相关信息；
2.公司提供：
Western blot检测图；完整的实验报告，包括对每个步骤的详细说明（具体操作方法、试剂或溶液浓度等）， 以及相应的结果及分析。
3.实验周期：
3-4周。
五、质量承诺
提供清晰的图片、可靠的数据和分析结果。
通过闵行区市场监督管理局认证 
