货号: | YH1716 |
样本: | 细胞上清液,血浆,组织均浆,血清等 |
标记物: | HRP/生物素 |
适应物种: | 大鼠 |
应用: | 科研研究用 |
检测方法: | ELISA |
检测限: | 详看说明书 |
供应商: | 上海依赫生物 |
数量: | 888 |
规格: | 48T/96T |
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用 途: 用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中肌酐(Cre)的测定。
检测原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中大鼠肌酐(Cre)的水平。向预先包被了大鼠肌酐(Cre)单克隆抗体的酶标孔中加入肌酐(Cre),温育;温育后,加入生物素标记的抗肌酐(Cre) 抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠肌酐(Cre)的浓度呈正相关。
试剂盒组成
名 称 96孔配置
12孔×8条 48孔配置
12孔×4条 备 注
1 标准品(120ng/ml) 0.5ml 0.5ml 稀释即用型
2 酶标包被板 1块 1块 已包被即用型
3 标准品稀释液 3ml 3ml 即用型
4 链霉亲和素-HRP 6ml 3ml 即用型
5 30x倍浓缩洗涤液 20ml 20ml 蒸馏水稀释
6 生物素标记的抗肌酐(Cre) 抗体 2ml 2ml 即用型
7 显色剂A液 6ml 3ml 即用型
8 显色剂B液 6ml 3ml 即用型
9 终止液 6ml 3ml 即用型
10 说明书 1份 1份 即用型
11 封板膜 2张 2张 不可反复使用
12 密封袋 1个 1个 即用型
操作程序
1.标准品的稀释:(本试剂系统提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释)按下表格执行:
60ng/ml (5号标准品) 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液
30ng/ml (4号标准品) 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液
15ng/ml (3号标准品) 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液
7.5ng/ml (2号标准品) 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液
3.75ng/ml (1号标准品) 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3.加样:1)空白孔:(空白对照孔不加样品,生物素标记的抗肌酐(Cre)抗体,链霉亲和素-HRP,其余各步操作相同 ;2)标准品孔:加入标准品50μl,链霉亲和素-HRP50μl(标准品中已事先整合好生物素标记抗体,故在操作时不加,只加链霉素-HRP);3)样本反应孔:加入样本40μl,然后各加入抗肌酐(Cre)抗体10μl、链霉亲和素-HRP(空白孔除外)50μl。盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育60分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。
7.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟。
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温馨提示:不可用于临床治疗。