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提供商：	北京孚博生物
服务名称：	稳定细胞株构建服务

稳定细胞株构建服务

北京孚博生物提供高质量稳定细胞株构建服务。

稳定表达细胞株（稳转细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。稳定表达细胞株则弥补了瞬时感染（或转染）一些功能实验中由于外源基因表达时间短的缺陷，便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白间相互作用。

用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞，根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆的基础上，得到单细胞长出的阳性单克隆，继而得到稳定转染细胞株。

北京孚博生物有着多年构建稳转细胞株的经验，已在H1299、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、MC3T3-E1、CHO、SiHa、3D4/2、HL7702、SW480、HepG2、SGC-7901、MGC-803、HT-29、Saos-2、U-2os、PC12、SK-BR-3、MCF-7、HMSC-ad 、GIST-T1、HEK293、293T等多个种属细胞中成功构建过表达和RNAi稳转细胞株。

服务流程

载体构建：构建含目的基因的重组表达质粒。
细胞转染：通过质粒将目的蛋白的编码基因导入到细胞内。使用的转染方法主要有DNA-磷酸钙共沉淀法，电击法，脂质体法。
目的蛋白初步检测：转染后应先确认转染效率和蛋白表达情况。
药物筛选：获得混合克隆细胞株，其细胞间生长速率及基因型存在差异。
单克隆筛选及鉴定：
l Elisa、WB等检测方法对单克隆进行筛选鉴定
l 基于流式细胞分选技术：细胞表面分子展示技术；胞内报告蛋白进行筛选（GFP基因等）；亲和力捕获表面展示技术（生物素标记）。
扩大培养：对单克隆进行筛选鉴定后需要对产量高生长状态好的单克隆进行逐级扩大培养。
稳定表达细胞株定性定量检测
稳定表达细胞株质量控制：传代/扩增过程的稳定性；安全性考察：应定期对细胞库和工作过程中细胞进行细菌、真菌和支原体检测。用于生物药生产的细胞株还应对细胞来源宿主动物潜在的内源性病毒和由于操作带入的外源性病毒进行检测。

服务内容

服务内容	交付	周期
过表达稳定细胞株构建	基因合成、测序验证报告、构建报告、三株稳定表达细胞株及稳定性报告、细胞培养说明书等基因合成、测序验证报告、构建报告、三株稳定表达细胞株及稳定性报告、细胞培养说明书等	12-15周
敲低稳定细胞株构建
敲除稳定细胞株构建