OCI-AML5【人急性髓细胞性白血病细胞】_其它_细胞_生化试剂库_商城

细胞操作说明
请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。

<1>本公司细胞发货有四种形式：T25瓶、离心管、血清及干冰。

T25是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T25瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态（有条件可以拍下此时细胞照片）。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用，如细胞密度高于80%，可以直接消化传代，相反则加入5-6mL培养基放回培养箱继续培养即可。
离心管是用15mL离心管发货的方式，只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及平衡参考上述T25瓶。平衡完成后，离心（1000rpm，3min）收集细胞，弃上清，用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。
血清是用牛血清直接发货的形式，是细胞冻存管加入含有细胞的牛血清的形式。收到细胞后，拆开自封袋，冻存管表面喷75%酒精消毒后，在超净台中打开冻存管，将细胞用1mL枪头轻轻几次以将细胞吹匀，接种至含有预热的培养基的培养瓶或皿中，显微镜下观察细胞是否吹匀，如果没有吹匀，继续吹匀至3-5个细胞一团，放回培养箱继续培养。
干冰是用本公司冻存液冻存细胞后，直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。

<2>相关问题

如不能在收到细胞后及时操作细胞，T25及离心管发货的细胞可以消毒后在37度过夜，血清发货的细胞可以在室温下静置1-2天（注意不要放冰箱），干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升华，请即刻复苏细胞。
T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（1200rpm，5min）后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍在加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心（1000rpm，3min）收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。

<1>细胞培养

细胞请于细胞培养箱中培养，大部分细胞是37℃，5% CO2，湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致，请仔细阅读相应的细胞说明书，使用正确的培养基及培养条件；
细胞于培养瓶或皿中培养，加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基（一般液面高度2-3mm即可）。

<2>细胞传代（以下步骤适用于10cm皿）

3min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞不再贴壁，即可加入第一步收集的培养基混匀；

<3>相关问题

部分细胞在传代后时，会有以下现象：细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞或者细胞长的极慢。出现以上现象时，可以咨询本公司技术人员此现象是否正常及相关处理方式，不要频繁换液，大多数细胞1周换液2-3次即可。
细胞碎片较多、背景较脏时，贴壁细胞用PBS漂洗两次、悬浮细胞打散后低速离心（900rpm，3min）能有效改善。
传代比例建议1:2-1:3，长得比较快的细胞可以1：3，比较慢的按1:2传代。传代后，建议不要使用传代前培养所使用的培养基，会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险。
细胞状态不好或者生长极慢的时候，可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度。
请不要随意更换培养基，因实验需要，可以逐步驯化。

悬浮传代：混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm离心3min，弃上清。再加5ml PBS重悬细胞，再离心后，用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗一次。

<1>冻存操作

<2>相关问题

10cm皿的细胞长满一般可以冻存2-3管，部分细胞长的比较慢，冻存的细胞密度要稍微大点，以防止复苏后生长困难。
冻存液中含的DMSO请使用细胞级DMSO，同时浓度不要太高。部分细胞在10%DMSO条件下冻存会死亡，所以DMSO浓度5%-8%是比较推荐的浓度。
细胞冻存及复苏遵循慢冻快融的原则，即冻存时温度不能急剧下降，应控制温度缓慢下降。复苏时应快速融化，融化后尽快加入培养基中。
冻存时建议设置冻存检测，即取0.2-0.3mL的冻存液重悬的细胞于一个冻存管中，与正常体积冻存的细胞共同冻存，至液氮后复苏检查冻存结果。冻检合格前，留一部分细胞继续培养，以防万一。