裸鼠成瘤

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更新: 2021-05-26
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人类肿瘤的可移植实验动物(裸鼠)肿瘤模型实验原理: 肿瘤是危害人类生命健康最严重的疾病之一,在不少国家,肿瘤的死亡率仅次于心血管疾病而占第二位。在我国,肿瘤也是一大类常见病,多发病。怎样预防和控制肿瘤是世界性的医学难题。裸鼠是随着近代医学的发展,特别是肿瘤学和免疫学研究的需要,在近十几年中发展起来的动物模型,由于裸鼠的免疫缺陷,在一定情况下,不排斥来自异种动物的组织移植,因此,可用其建立理想的人类肿瘤可移植实验动物肿瘤模型。人体肿瘤移植于免疫缺陷动物(裸鼠),能保持其生物学特性,用于研究人体肿瘤对药物的敏感性有很大帮助。早期工作是将人体肿瘤移植于动物缺乏免疫机能的特殊部位,如鸡胚、动物的眼前房、仓鼠颊囊内等,虽有一定比例的成活率,但因肿瘤生长缓慢又受移入部位包膜的限制,肿块往往较小,难于传代,更不能适应需要较多瘤源的实验治疗工作。因此,利用裸鼠建立肿瘤模型进行防治研究,是基础医学研究中的重要课题。
操作步骤:
1.细胞的状态是成瘤实验的关键,所以细胞生长状态一定要好,取处于对数生长期的细胞,细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
2.胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍,目的为去除细胞中的血清。
3.PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度,一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支,接种体积为0.1ml,因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml
4.细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下,一般尽量在半小时内完成,途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。
5.选择的裸鼠一般在5-8周龄,体重18-20g左右,种植部位选择血供丰富区域,如腋窝中后部、腹股沟中上部。
6.接种前用枪将细胞悬液充分的吹散,防止细胞成团而降低细胞成活率。
7.接种时,针头在皮下进针深一点,约1cm深,减少注射后细胞悬液从针眼溢出。
8.如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤,小拇指夹住裸鼠尾巴。
9.接种后一周左右可以见到皮下开始出现肿块。
10.根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量,一般皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大,一般不要超过1000mm3 ,肿瘤负荷过大常常会以违背动物伦理而被杂志社刁难(因为这个问题悲惨地被plos one拒过稿)。
11.肿瘤大小测量一般为1周两次,游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V=1/2*a*b2 (a为长轴,b为短轴)
12.皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA,一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等
 
实验室可开展的裸鼠成瘤
HT-29细胞人结肠癌异种移植裸鼠模型
HeLa 细胞人子宫颈癌异种移植裸鼠模型
SW480细胞人结肠癌异种移植裸鼠模型
SW620细胞人结肠癌异种移植裸鼠模型
Hep2细胞人喉癌异种移植裸鼠模型
A549细胞人肺癌异种移植裸鼠模型
ES-2细胞人卵巢癌异种移植裸鼠模型
MGC-803细胞人胃癌异种移植裸鼠模型
SKOV3细胞人卵巢癌异种移植裸鼠模型
PG49细胞人肺腺异种移植裸鼠模型
Colo 26小鼠结肠癌细胞裸鼠成瘤模型
A2780人卵巢癌细胞裸鼠成瘤模型
Bcap-37人乳腺癌细胞裸鼠成瘤模型;
S180小鼠肉瘤细胞裸鼠成瘤模型
L1210小鼠淋巴白血病细裸鼠成瘤模型
MCF-7细胞人乳腺癌异种移植裸鼠模型