小鼠原代心肌细胞_其它_细胞_生化试剂库_商城

货号：	ME-2002005

iMedcell ^® 小鼠原代心肌细胞

●规格：1×10⁶cells/管
●活细胞运输：收到细胞后，请立即放入培养箱中培养；
冻存细胞运输：可暂存于-80℃冰箱或液氮长期储存。
小鼠原代心肌细胞产品简介：
小鼠原代心肌细胞产品是一种高纯度、高活性的细胞产品。该产品分离自小鼠胚胎心脏组织，采用埃德斯生物的小鼠心肌细胞分离试剂盒进行分离、培养，可表达心肌细胞蛋白标记物和保持细胞收缩性。同时采用二级消化法、梯度离心加梯度贴壁法可特异性除去非心肌细胞，获得高纯度、高活性的小鼠原代心肌细胞。这些细胞具备典型的心肌细胞电生理特性，自律性、兴奋性、传导性和收缩性。

小鼠原代心肌细胞包含材料：

产品货号	名称	规格	数量
ME-2001003	小鼠原代心肌细胞	1×10⁶	1瓶(支)
ME-1001016	小鼠心肌细胞分离试剂盒	100 ml	1瓶

小鼠原代心肌细胞培养材料准备

使用75%酒精擦拭试验台；
准备酒精灯、酒精棉及用于盛放实验处理后小鼠的垃圾袋；
剪刀、镊子、微型镊子等解剖用具需提前进行灭菌处理；
吸取适量HBSS-HEPES至培养皿中并放置于冰上（细胞房内操作）。
Wash buffer一直放于冰上保持低温。

小鼠原代心肌细胞操作方法

取心脏：

左手捏住小鼠背部皮肤，使用酒精棉（95%酒精）擦拭小鼠胸腹，用解剖剪在小鼠剑突处正中线偏左向上剪开，略压胸骨，使心脏自然跳出，用弯镊子勾住心脏根部，取出心脏，置于盛有遇冷Wash buffer的培养皿中。
在解剖镜下使用微型镊子和解剖剪剪去心房。

组织清洗和预消化：

经酒精擦拭后，将培养皿移入细胞房超净工作台，用遇冷的Wash buffer清洗3次，去除血污后，将心脏剪成约1mm³的组织块，再清洗2次，

将组织块移入培养瓶中，加入适量Cell Dissociation SolutionⅠ后放入4℃冰箱消化过夜。
- 24h。

第二天：

实验准备：
37℃，将Mouse Cardiomyocytes Culture Medium放入水浴中加热。
终止消化：

把培养瓶从4℃冰箱取出并将其中的心脏和消化液移入一个新的50ml离心管中，加入等量经预热的Mouse Cardiomyocytes Culture Medium。离心管在37℃水浴锅中摇动消化3min后弃上清；

消化：

A. 在50ml离心管中加入5ml Cell Dissociation SolutionⅡ，37℃水浴中摇动消化1min后将上清液加入遇冷的10ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium中，混合均匀并置于冰上保持低温。

B.加入5ml Cell Dissociation SolutionⅡ，37℃水浴中摇动消化1min后弃上清。
C. 重复3.A的步骤直至组织完全消化。
注意：吸取上清时尽量避免吸出沉淀。
D.将收集的上清在常温下1260rpm，离心5min。轻轻吸除上清，用Mouse Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。

差速贴壁：

将重悬的细胞经过100μm滤膜过滤后铺入已经预先经过明胶包埋的培养皿中，放入细胞培养箱（37℃，5%CO₂）中孵育75min。
取上清移至新的经明胶包埋的培养皿中，重新放入细胞培养箱中孵育75min。

注意：可倾斜培养皿，取培养基沿壁轻轻冲洗。

细胞铺板：

将Mouse Cardiomyocytes Culture Medium预先在37℃水浴中加热。
取出培养皿，将上清移入15ml离心管中，530rpm，离心5min，轻轻吸除上清，用已经预先加热至37℃的1ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。
利用血细胞计数板进行细胞计数，用台盼蓝检测细胞存活率。
根据所计的细胞数使用Mouse Cardiomyocytes Culture Medium进行稀释调整细胞浓度，将细胞移至预先使用明胶包埋过的48孔板或3.5cm培养皿中。
将培养皿放入细胞培养箱中培养24h后观察细胞状态，若细胞状态佳且浓度合适，则可进行后续实验。

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