免疫印迹Western技术服务_免疫组化/免疫沉淀/Western blot_免疫学服务_技术服务库_商城

提供商：	威奥
服务名称：	免疫印迹(Western-blot)
规格：	可以参观学习实验

技术服务价目表

服务类型	预实验（人工费+试剂费）	正式实验（人工费）	结果内容	备注
HE染色	20元/张	20元/张	染好色的切片	客户提供蜡块或者白片
包埋	无	30元/蜡块	包埋好的蜡块	客户提供福尔马林浸泡的组织
切片	无	10元/张，量大从优	切好的白片	客户要求单独切白片时，10元/张，量大从优
免疫组化（石蜡）	60元/张，每个抗体做2-3张预实验片	60元/张，量大从优	染好色的切片	免疫组化实验，客户需提供蜡块或者切片及一抗； WB实验，客户需提供新鲜冰冻组织或者细胞及一抗
WB	无	1000元/张膜（8个样，一个抗体），内参免费，量大从优	整理好的实验报告及胶片	免疫组化实验，客户需提供蜡块或者切片及一抗； WB实验，客户需提供新鲜冰冻组织或者细胞及一抗
Tunel	60元/张，做2-3张预实验片	60元/张	染好色的切片	客户提供蜡块或者切片及Tunel试剂盒，公司可代购tunel试剂盒
原位杂交	70元/张，做2-3张预实验片	70元/张	染好色的切片	客户提供蜡块或者切片及原位杂交试剂盒，公司也代购试剂盒
拍照		10元/张切片	电子版照片	100、200、400倍(任选)
Real-time PCR		160元/标本/基因（3次平行反应），内参及引物设计和合成免费	整理好的电子版实验报告	客户提供新鲜冰冻标本（组织或处理好的细胞）及基因中英文全称，其余试剂由公司提供
ELISA		代测费是300元/盒子，常规指标的ELISA试剂盒，公司都有现货，购买这些试剂盒，可免费代测	整理好的电子版实验报告	客户提供收集好的标本（血清、血浆或细胞培养上清等），如果客户标本是组织，需要做组织匀浆和蛋白定量，组织匀浆是12元/标本，蛋白定量是200元/次

免疫印迹(Western-blot)技术服务

原理：

免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。

² 免疫印迹实验流程：

◎ 细胞及组织蛋白质抽提；

◎ 蛋白质定量；

◎ 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)；

◎ 蛋白质转膜；

◎ 膜的封闭；

◎ 一抗、二抗孵育；

◎ 结果检测：化学发光法检测，X 胶片曝光显影；

◎ 数据分析；

² 实验要求：

1. 客户需自备一抗，本公司可代为购买一抗。

2. 标本尽可能新鲜；标本量：组织块大于100mg；细胞数大于1×10⁶。

3. 技术部将在收到标本后20-30个工作日之内提交实验结果，实验结果以数据和图片的

形式提交给客户。、

标本收集及注意事项：

u 对于组织样品：

采集新鲜组织，离体时间尽量不超过15分钟，用锡箔纸包埋或者放入冻存管中，先放入液氮中速冻几个小时或者过夜，再放入-80度冰箱或液氮保存。

n 细胞样品：

1、贴壁细胞：取大约1*107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入适量的PBS悬浮细胞，转入离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入液氮中速冻，然后转入-80度冰箱保存。

2、悬浮细胞：离心收集细胞，弃去培养液，加入适量PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入液氮中速冻，然后转入-80度冰箱保存。
Western疑难问题解答

无显色信号问题原因分析：
1.裂解产物中抗原含量不足
a.抗原无表达或表达含量过少
b.蛋白讲解或上样量不足
c.裂解产物制备失误
2.制胶浓度比例不合适
3.转膜不完全
4.一抗稀释浓度过大
5.二抗与一抗稀释浓度不匹配
6.显色系统灵敏度不足

非特异性杂带出现原因分析：
1.封闭或清洗不彻底
2.一抗浓度过高
3.蛋白讲解
4.抗体与非特异性抗体交叉反应
5.蛋白间聚集作用，形成二聚体
6.转移膜使用不当
7.操作过程中转移膜干燥

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