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提供商：	和元上海
服务名称：	慢病毒包装
规格：	IU/ml

慢病毒包装

慢病毒包装简介：

慢病毒（Lentiviruses）属于逆转录病毒科。它是一种改自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒载体，同时也是一种RNA病毒，可以利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定长时表达。

慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因治疗的转移载体。 HIV（Human immunodeficiency virus）、EIAV（Equine infectious anemia virus）、 FIV（Feline immunodeficiency virus）、 SIV（Simian immunodeficiency virus）。其中研究最多最为透彻的是 HIV。

慢病毒包装主要用于难转染的细胞，稳定株的制备，神经系统的定位注射实验等。

慢病毒包装实验流程：

1.根据目的基因相关信息（序列，基因序列号等）获取目的基因；

2.根据客户要求选择对应载体；

3.将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体；

4.测序鉴定重组质粒，高纯化（不含内毒素）提取的重组质粒；

5.使用高纯提重组载体和慢病毒包装质粒共转染 293FT 细胞，进行病毒包装并收集上清液；

6.通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；

7.使用病毒液感染 293T 细胞，药物筛选细胞，构建稳定表达细胞系。

慢病毒包装的生产流程图

慢病毒载体构建指南

载体类型	说明	服务方式	应用途径
pLOV	使用II型启动子的载体，用来表达mRNA、LncRNA和mir30L类似结构	载体构建及病毒包装	基因表达
		特异性启动子载体构建	组织特异性表达
		mir30结构的载体构建及病毒包装	miRNA、shRNA表达
pLKD	III型启动子（H1,U6）载体，主要用以表达shRNA和miRNA	定制靶点	基因干扰
		成套靶点（三个）及病毒包装	提供一个有效干扰
		miRNA表达载体构建及病毒包装	高表达miRNA
		miRNA抑制载体构建及病毒包装	封闭miRNA表达

启动子性质与应用

启动子名称	性质和作用	应用细胞
CMV	人巨细胞病毒启动子，表达强	肿瘤细胞、原代细胞
CAG	CMV与鸡beta-actin的嵌合启动子，表达较强	干细胞、原代细胞
UbC	泛素C启动子表达广泛	干细胞、原代细胞、立体神经元
EF1a	延长因子启动子	干细胞、血液来源细胞

标记基因性质与应用

筛选标记	性质	筛选方式
PuroR	嘌呤霉素抗性基因	嘌呤霉素1~10ug/ml，2-3d
NeoR	新霉素抗性基因	G418 100~1000ug/ml，2-3d
GFP	绿色荧光蛋白，激发波长488nm，发射波长507nm	流式分选
RFP	红色荧光蛋白，激发波长563nm，发射波长582nm	流式分选
mCherry	红色荧光蛋白，激发波长587nm，发射波长610nm	流式分选

表达载体设计要点

设计方式	载体设计	优点	缺点
独立表达	目的基因单独或与标签组成表达框	保证结构独立性	难于观察和确定感染效率
融合表达	与标记基因直接相连表达融合蛋白	可反映蛋白分布	影响蛋白结构独立性
非融合表达	通过2A序列分隔目的基因和标记基因	结构独立，确认感染效率	无法反映蛋白分布

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