提供商: | 和元上海 |
服务名称: | AAV病毒应用-心脏、肝脏、肌肉、肺 |
AAV病毒应用-心脏、肝脏、肌肉、肺
病毒载体简介: 病毒载体是分子生物学家常用的、能将遗传物质导入细胞中的工具,可以在体内(in vivo)或者体外(in vitro)中应用。病毒已经进化出专门的分子机制,从而能有效地将它们的遗传物质导入到被感染的细胞内。分子生物学家第一次利用这种机制是在20世纪70年代,Paul Berg使用了含λ噬菌体DNA、且经过改造的SV40病毒感染猴子肾脏培养的细胞。现在,病毒载体广泛应用于各个领域的基础研究、精准的基因治疗、疫苗的开发等。
常用病毒载体的基本特性:
常用病毒载体的基本特性:
慢病毒 | 腺病毒 | 腺相关病毒 | 逆转录病毒 | |
直径范围 | 90-110nm | 60-90nm | 20-30nm | 90-100nm |
整合机制 | 随机整合 | 非整合 | 定向低频整合 | 随机高频 |
滴度范围 | 108-9tu/ml | 1010-11pfu/ml | 1012-13vg/ml | 107-8tu/ml |
克隆容量 | 4k | 5-6k | 2.5k | 1.6k |
表达时间 | 2-4天 | 1-2天 | 2周 | 2-4天 |
和元生物载体(部分)列举如下:
pLenti-CMV-3FLAG-EGFP
pLenti-EF1a-EGFP-3FLAG
pAdeno-MCMV-EGFP-3FLAG
pAdeno-EF1a-MCS-MCMV-EGFP-3FLAG
pAAV-CAG-MCS-3FLAG
pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG
pAAV-CAG-MCS-mCherry-3FLAG
pAAV-CAG-EGFP-2A-MCS-3FLAG
pAAV-CAG-mCherry-2A-MCS-3FLAG
pAAV-CAG-MCS-ECFP-3FLAG
pAOV-CaMKIIa-MCS-EYFP-3FLAG
pAAV-CMV-MCS-3FLAG
pAAV-CMV-MCS-EGFP-3FLAG
pAAV-CMV-MCS-mCherry-3FLAG
pAAV-CMV-EGFP-2A-MCS-3FLAG
pAAV-CMV-mCherry-P2A-MCS-3FLAG
pAAV-CMV-bGlobin-MCS-3FLAG
pAAV-CMV-bGlobin-MCS-EGFP-3FLAG
pAAV-EF1A-MCS-3FLAG
pAAV-EF1A-MCS-EGFP-3FLAG
pAAV-EF1A-MCS-mCherry-3FLAG
pAAV-EF1A-EGFP-P2A-MCS-3FLAG
pAAV-EF1A-mCherry-P2A-MCS-3FLAG
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重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus,rAAV)是利用AAV2基因组DNA和不同血清型AAV衣壳蛋白包装成的病毒载体,一般标记为AAV2/N(N指衣壳血清型),有时仅标注血清型,如AAV9即AAV2/9。AAV因为免疫原性低,目前没有发现致病报道,并且表达持续时间较长,在实验室被普遍采用。现在对实验要求较高的科研工作者很多会推荐选用AAV载体。
在AAV的各种血清型中,AAV9是目前公认的高效特异性靶向心脏表达的病毒载体血清型(图1)。
图1 不同血清型AAV感染小鼠心脏组织。cTnT-EGFP包装进AAV衣壳血清型2,1,6,8,9后分别通过颈静脉注射1周龄小鼠,4周后检测小鼠心脏组织EGFP荧光 (Gene Therapy. January,2011)
AAV9经过系统注射(经血液循环)途径,优先感染心脏、肺的平滑肌、骨骼肌及其他脏器的平滑肌,也会瞬时感染肝脏,但在肝脏中的表达不持久。如果将AAV9递送到新生鼠中,病毒能够穿过血脑屏障,实现在大脑的中枢神经系统中高效表达(图2)。<和元生物可为您提供多种pAAV-EGFP病毒载体>
图2 AAV9-EGFP注射新生小鼠P4,1个月后冰冻切片检测各组织EGFP荧光(Cell Research. August,2016)