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份 库存999份
| 货号： | E1WP1012 |
| 供应商： | Enogene |
| 数量： | 999 |
| 规格： | 100.0 |
EnoGene™ 全蛋白提取试剂盒
（EnoGene™ Total Protein Extraction Kit）
（EnoGene™ Total Protein Extraction Kit）
一、产品介绍
本试剂盒适用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液匀浆、裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究，但不适用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。
二、试剂盒组份
| 组份 | E1WP1011 （50 tests） | E1WP1012 （100 tests） | 储存温度 |
| 裂解液 | 50 mL | 100 mL | 4℃ |
| 磷酸酶抑制剂 | 500 μL | 1000μL | -20℃ |
| 蛋白酶抑制剂 | 50 μL | 100 μL | -20℃ |
| PMSF（100mM） | 500 μL | 1000 μL | -20℃ |
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
低温高速离心机、剪刀、微量移液器、1.5m L离心管、涡旋振荡器、PBS
四、操作步骤
(一) 、对于细胞
1、裂解液工作液的准备（根据每次实验实际使用量配制所需体积）
在每1mL 冷裂解液加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2、样品的处理
A、 悬浮细胞
a、 离心（2000rpm，5min）收集细胞，尽量吸尽上清。
b、 用PBS洗一遍，离心（2000rpm，5min）弃上清，留下细胞沉淀备用。
c、 转入第3步进行操作。
B、 贴壁细胞
a、 培养好的细胞吸去培养基后，加入10mL冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除残留的培养液。
b、 用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液（不含胰酶）处理细胞使细胞脱落，并用移液器吹散细胞。
c、 将细胞溶液转至新的冰冷离心管中，离心（2000rpm，5min）吸尽上清。
d、 用PBS洗一遍，离心（2000rpm，5min）弃上清，留下细胞沉淀备用。
e、 转入第3步进行操作。
3、 加入上述配制好的冷裂解液工作液加入量如下表所示：
| 细胞数量 | 培养板或培养瓶的规格 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 100mm培养板或150ml培养瓶 | 1 mL～2 mL |
| 5×106个 | 60mm培养板或75ml培养瓶 | 0.5 mL～1 mL |
5、离心（12,000rpm，4℃）15min，取上清即为全蛋白提取物，进一步进行蛋白定量（建议用BCA法）。
6、分装保存于-20℃（短期内使用）或-70℃（长期保存），避免反复冻融。
（二）、新鲜组织
1、 裂解液工作液的准备（根据每次实验实际使用量配制所需体积）
在每1mL 冷裂解液加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待
2、 称取100 mg左右的新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干。
3、 把组织放在一个置于冰上的离心管或培养皿中，用剪刀或刀片把组织剪切成非常细小的组织碎片，放置于玻璃匀浆器中。
4、 加入0.5～1 mL预冷的裂解液工作液，冰上研磨组织20次。
5、 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，冰浴放置15min。
6、 离心（12,000rpm，4℃）15min，吸取上清即为全蛋白提取物，进一步进行蛋白定量（建议用BCA法）。
7、 分装保存于-20℃（短期内使用）或-70℃（长期保存），避免反复冻融。
五、注意事项：
1、 全程低温操作。
2、 PMSF要在裂解液加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中不稳定而失效。
3、 本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果较差。
4、 需自备PBS。
5、 提取蛋白后，如有必要，可透析除去表面活性剂。
6、 请穿实验服并戴一次性手套操作。
六、保存条件：
-20℃保存，一年有效。
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温馨提示：不可用于临床治疗。
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