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【求助】求解：构建质粒时加了两个酶切位点，测序结果也显示存在... 已解决
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- 解决时间 2024-12-22 13:03
【求助】求解：构建质粒时加了两个酶切位点，测序结果也显示存在，双酶切鉴定却未见切出条带
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2015-12-14 16:23
How big is the insert? What are the two enzyme sites? Do you have single enzyme digestion results?
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2015-12-18 01:37
mpark 首先谢谢您的回复！ 我用的是pGEMT载体3000bp 插入片段1300bp左右， 片段两边添加的是PmeⅠ 和XbaⅠ 这两个酶切位点， 我是用来做突变后再连入其他载体上的。 前几天也看见其他帖子里有说用单酶切，不过没鉴定过，打算再尝试一下。另外想请教下我会不会是碰到了甲基化的原因切不出来？ |
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2015-12-18 16:34
Try to use any enzyme that can cut cloned construct ( 3.0 kb vector plus 1.3 kb insert) only once and run gel long with the linearized 3.0 kb pGEMT.
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2015-12-18 14:37
XbaI会受到甲基化的影响。在前面存在某些序列的时候。
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