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百万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序显示目的基因已连在载体... 已解决
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- 解决时间 2025-01-30 16:38
百万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序显示目的基因已连在载体上，菌落PCR也可以P出目的条带，为什么双酶切只有一条带！！！！
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2016-12-14 10:07
Is the construct maxiprep sequenced? If it is, have you tried sequencing using primers the nucleotide sequence of which is derived from the insert DNA? |
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2016-12-17 02:40
试过的，分别涉及两对引物，一对在插入的目的基因上，一对在载体上，做质粒PCR都可以P的出目的条带，但是再做双酶切，都只有一条带。 |
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2016-12-12 08:19
Can you find the two enzyme sites in the sequence data? |
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2016-12-12 17:00
是不是连接后没有酶切位点？
我之前做的单酶切，连接目的基因后，又做的酶切，通过没有酶切成线性质粒，证明我的目的基因连接上了。跟你的思路完全相反。 仅供参考。 |
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2016-12-12 19:30
会不会是其中一个酶切位点发生了突变或者甲基化导致切不下来? |
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2016-12-14 17:02
重新连接后的目的序列，经测序分析，双酶切位点都还在的。谢谢各位，已找到原因。 |
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2016-12-18 16:06
您好，我是新手，最近遇到了与你一样的问题，请问你是怎样找到问题所在的呢？？
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