【求助】请问，有人提DNA时加入tRNA吗..._RNA文库制备试剂盒_二代测序_分子类_知道

游客	收藏 \| 举报 2007-07-03 13:49 关注：220 回答：8 【求助】请问，有人提DNA时加入tRNA吗... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-11-23 23:28 【求助】请问，有人提DNA时加入tRNA吗

游客	举报 2007-07-03 16:18 qiagen公司在微量dna提取试剂盒中加入一种叫rna carrier的东西，可以显著提高得率，本质上好像就是一种polyA 的tRNA，作用原理不大清楚，作用就是提高得率。好像很神秘的样子，现在天根的新试剂盒里面也有这个东西了。这个东西在sigma有卖的，能不能直接加进去用还不清楚。

游客	举报 2007-07-08 04:13 是啊，我也看到了，今天看到Gunther那篇扩HBV全长的经典文章上写到从血清里提取HBV DNA时在乙醇沉淀时加入20ug的tRNA as a carrier。还想起来我用过的Qiagen的病毒RNA提取试剂盒，里面的carrier RNA 是固体的，需要溶在AVL buffer里。他们给的carrier 大概310ug的样子。

游客

举报 2007-07-10 03:07

最近看到这样一段话，可以解释tRNA作用的原理，跟大家分享一下：

“核酸醇沉淀的原理，按照分子克隆中的描述，是用阳离子中和了磷酸根的负电荷后，核酸“无性”结合才能沉淀下来。低浓度核酸沉淀的条件一般要做如下改变：使用长时间的低温、使用更高比例的醇、使用 tRNA 之类的东西。下面就用 Flash 语言的特点，描述一下“无性”的核酸是如何结合的。

溶液中的单个核酸，虽然是“无性”的，对其它的核酸，仍然是有引力的 (大小与距离相关)；同时，核酸分子受到的另外一个力，来自分子运动。在一般情况下，核酸之间的引力比分子运动产生的力小许多；只有当核酸之间的距离足够近时，引力才能克服分子运动产生的力，使两个核酸结合到一起。结合在一起的两个核酸又共同对其它的核酸产生引力 (该引力比单个核酸的要大)，结合上更多的核酸 … 最终沉淀下来了。低温和更高浓度的醇都有利于降低分子运动产生的力，tRNA 能提高总核酸浓度进而通过与目的核酸的结合提高了目的核酸之间的引力，所以低浓度核酸的沉淀条件如上。至于 2 价镁离子有利于低浓度核酸的沉淀原因，可能是镁离子要被同一核酸分子的两个磷酸根结合，这种结合的结果是核酸分子变得更立体了：引力越集中，对外就越大。
”

游客	举报 2007-07-13 16:52 由于我做的样本中DNA含量比较低，我最近就按上面一段话对实验进行了改进：在无水乙醇沉淀一步中，我加了3倍体积的乙醇（原来是2.5倍体积）；在－20度中沉淀了有18个小时（原来沉淀12个小时）；加了tRNA（原来没加）确实沉淀比原来的多了，原来用肉眼都看不到。如果有战友跟我有同样的问题，不如试着进行一下这样的改进。

游客	举报 2007-07-08 19:29 你的tRNA是从sigma买的吗？能不能说一下全名？

游客	举报 2007-07-12 14:15 应该是一种共沉淀剂。如 TaKaRa的DNAmate 鼎国的肝糖原

游客	举报 2007-07-04 21:06 to bact 我订的是Roche的面包酵母tRNA

游客	举报 2007-07-07 15:23 谢谢xinxianyongqi

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