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细菌RNA试剂盒提完后有DNA污染，怎么去除... 已解决
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细菌RNA试剂盒提完后有DNA污染，怎么去除
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2017-10-14 23:50
细菌RNA试剂盒提完后有DNA污染，去除DNA的方法：做普通pcr，看看条带对不对。DNase I 处理，酚氯仿抽，然后isopropanol沉淀，DEPC水溶。 不需专门灭火，因为在反转录前有一个步骤是加热变性。一般是75度5min 后面取不超过40%反转录体积的RNA用于反转录，但反转录前最好检测一下RNA质量，免得浪费反转录酶。
但是，这样做的前提的，RNA提得要好，浓度要高，这样免得RNA降解到不能用了。因为在有二价阳离子的（DNAseI buffer含有）情况下，RNA在60度以上时必然发生非酶促降解。 |
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