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【求助】real time PCR 能否用普通taq酶系统来... 已解决
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【求助】real time PCR 能否用普通taq酶系统来做？
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2007-07-05 22:01
帮你顶一下,我也想知道.不过我是做sybr green i的.:)
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2007-07-07 20:37
可以呀,我们实验室的ABI-7700 一直是用普通taq酶做呀.包括探针法和染料法在内.
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2007-07-09 04:05
那请问sf20960，你们的体系也是用普通反应体系么？
大多数普通taq酶附带的buffer是有Mg离子的，我看文献上说，realtime的Mg离子终浓度要比普通PCR高一些的，你们调整了么？ 能不能把您的反应体系以及反应条件分享一下呢？ 谢谢啦^_^ |
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2007-07-12 10:13
我们用的是20*buffer, 里面没有Mg离子,自己调整Mg离子用量.
realtime的Mg离子终浓度要比普通PCR高一些.50微升体系用浓度为50uM镁离子2.0微升,一般的用1.5ul左右. 条件:94度 300s 94度 15s 60度 60s 40循环 |
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2007-07-05 22:36
我们试验室大量用酶,而普通taq酶比较便宜,经费又有限,所以.......
如果你们条件好的话,最好换贵的,那样效果更好! |
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2007-07-05 00:22
没问题.Mg2+也不是那么精确,有必要么.
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2007-07-04 17:42
谢谢sf20960 ，calab
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2007-07-13 18:36
那有用单独的sybr green i 做的好的XDJM吗?
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2007-07-14 09:57
呵呵，我原来就用sybr做。。。。
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2007-07-05 16:24
我说的意思是有没用单买的SYBR GREEN I 做real-time PCR的,因为很多都是用公司的MIX的,而我由于经费有限想把SYBR GREEN I 买过来,和普通PCR一样加样做,请有用这个做的效果好的吗?谢谢.
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