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荧光定量PCR，模板浓度够高，CT仍30多，原因何在... 已解决
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- 解决时间 2024-11-21 22:49
荧光定量PCR，模板浓度够高，CT仍30多，原因何在
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2017-05-03 18:16
tm值是否为单峰，调整为低浓度，或者倍比稀释看看，浓度大有时候并不是好事
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2017-05-06 02:22
你的cDNA浓度是怎么测出来的？一般测的不是RNA浓度嘛？cDNA因为反转的加入了很多dNTP所以不准的
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2017-05-04 16:26
什么没看 是单峰的，稀释了10后，内参的CT值又大了 |
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2017-05-07 08:15
chixinzero 我是反转录后测的cDNA浓度。是从六孔板一空的细胞用trizol 提的RNA，是细胞太少了吗？有一次也测过RNA，浓度有700 ng/ml左右，但没做PCR。 |
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2017-05-08 04:08
Mis願 你在反转的时候，其实加入的很多的dNTP，但是测浓度的原理，也是测碱基的含量，所以你测cDNA的浓度肯定不对的，还有就是一般我们反转都会测完RNA浓度后统一配平到一个浓度，以此来确定cDNA浓度 |
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2017-04-27 04:07
chixinzero 配平具体怎么做，怎么来确定cDNA的浓度。对咯，我是做相对定量的，这个有关系吗？ |
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2017-04-27 07:36
其实没关系的，每个反转试剂都有具体的说明的吧，我用过两个都说让配成统一浓度的
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2017-05-07 14:57
Mis願 给你个建议，换个试剂盒试一下。如果RNA跑胶没问题的话。 |
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2017-05-04 15:11
Mis願 学习 |
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2017-04-28 06:27
溶解曲线单峰，那么温度值是多少？如果低于80很有可能都是引物二聚体，有没有阴性对照？看阴性对照的值和样品值是否相近。内参都那么大的值，很怀疑模板有问题，或者引物有问题啊，你可以先跑个普通pcr试试，看看能否跑出单一目的条带 |
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