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  • 游客
收藏 | 举报 2017-04-13 21:10   关注：221   回答：12

请教大神！荧光定量PCR cDNA加样量的问题...

已解决 悬赏分：0 - 解决时间 2024-12-22 10:43
请教大神！荧光定量PCR cDNA加样量的问题

我来回答
  • 游客
举报 2017-04-22 06:40
重新稀释了样品做了actin结果CT 值仍然很高
测的RNA 的浓度不低啊 是哪里出了问题？
  • 游客
举报 2017-04-19 15:21
nanakaro
重新稀释了样品做了actin结果CT 值仍然很高
测的RNA 的浓度不低啊 是哪里出了问题？

浓度高有可能是假象，纯度的因素要考虑在内
  • 游客
举报 2017-04-24 21:06
我是maybe

浓度高有可能是假象，纯度的因素要考虑在内

谢谢maybe用Trizol提取 以后需要再用试剂盒专门去除里面的DNA 吗
  • 游客
举报 2017-04-24 22:40
你逆转录之前应该测RNA的浓度呀
  • 游客
举报 2017-04-24 01:55
Rose玲
你逆转录之前应该测RNA的浓度呀

我有测RNA 浓度在1000ng /ul左右的OD 值1.9
  • 游客
举报 2017-04-14 21:19
nanakaro

我有测RNA 浓度在1000ng /ul左右的OD 值1.9

A260／280,A260／230怎么样，逆转录按RNA多少来逆的
  • 游客
举报 2017-04-16 04:48
Rose玲

A260／280,A260／230怎么样，逆转录按RNA多少来逆的

都在正常范围的取了2ug 的RNA反转录 最后realtimePCR取了总量500ng加的 说明书要求的量引物也在规定范围新配的结果actin跟目的基因基本都没有值出来。。。
  • 游客
举报 2017-04-18 06:10
nanakaro

都在正常范围的取了2ug 的RNA反转录 最后realtimePCR取了总量500ng加的 说明书要求的量引物也在规定范围新配的结果actin跟目的基因基本都没有值出来。。。

2ugRNA逆的话，逆好的cDNA我们一般都加水稀释的，你可以取几ulcDNA原液稀释5倍再点，还有你要看一下逆转录体系和程序以及qPCR的程序和体系有没没错误
  • 游客
举报 2017-04-23 08:21
Rose玲

2ugRNA逆的话，逆好的cDNA我们一般都加水稀释的，你可以取几ulcDNA原液稀释5倍再点，还有你要看一下逆转录体系和程序以及qPCR的程序和体系有没没错误

谢谢你啊我都检查过了 跟说明书都一样的 实验室也用了很久了。。。到我做就不行了
  • 游客
举报 2017-04-13 22:17
Rose玲

2ugRNA逆的话，逆好的cDNA我们一般都加水稀释的，你可以取几ulcDNA原液稀释5倍再点，还有你要看一下逆转录体系和程序以及qPCR的程序和体系有没没错误

找到问题了谢谢战友啦
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