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通过CRISPR/Cas方法敲除细胞内的一个基因，能通过设计... 已解决
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通过CRISPR/Cas方法敲除细胞内的一个基因，能通过设计引物用PCR的方法检测敲除效率吗？
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2017-05-08 19:38
你有敲除相关的信息吗，比如当时的测序结果，到底敲掉的是哪里，掉了几个碱基之类的，如果什么都不知道的话，直接用引物PCR，可能不管敲没敲掉都是可以P出来的而且带比较相近，区分不出来，如果有相关信息，就在敲掉的位置设计引物，看是否能达到WT能P出来，KO组p不出来。 |
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2017-05-10 21:48
liuzz2016 p出来条带送测序。 |
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2017-05-08 18:48
sicaujj 这个PCR产物必须覆盖到突变位点？也行 |
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2017-05-02 23:37
展开引用 午后的红太狼 ...... 如果是单基因突变或敲除造成的密码子移位导致的敲除，因为突变范围小，在敲除的位点上设计引物做PCR，会不会照样能P出来。 简单的说，可能就删掉一个碱基，会影响到20个bp长的引物的PCR么？ 求指点。 |
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2017-05-11 13:35
liuzz2016 不会是只有一个碱基的缺失的，我之前做过测序，一半以上都是缺失的十个碱基左右。所以也可以根据pcr产物的有无来判断。但是做ko是要移码突变才可以，只要是缺失的3的倍数碱基很有可能对这个蛋白的功能没有影响的。 |
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2017-05-05 18:35
sicaujj 这样果然是最简单的办法，是我想复杂啦 |
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2017-05-06 03:24
liuzz2016 只有1个碱基的话，不会影响PCR的结果 |
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2017-05-05 21:51
请问你是打算拿Cas敲出基因嘛
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2017-05-08 12:20
sicaujj 你好，我想问一下，我P出来后直接送测序就可以了吗？ 还需要提供其他的哪些信息吗？ |
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2017-05-11 20:09
sicaujj 测序的引物该提供什么呢？ |
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