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crispr/cas9 实验设计... 已解决
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- 解决时间 2024-12-22 11:12
crispr/cas9 实验设计
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2017-05-04 20:39
那么后续你选择性的做个分选rfp 阳性细胞。可以先做个wb检测蛋白的表达有没有下去.然后再根据你的测序结果判断的移码突变的比例，分单细胞到96 孔板，然后扩大培养，比如，你的移码突变做出来是40%。那么十个扩大培养里面就有四株是ko的。可以再做wb检测。 |
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2017-04-29 10:19
先设计sgRNA，买Crispr质粒，把sgRNA克隆到质粒里，然后转染细胞，然后进行PCR，看有没有敲除。 |
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2017-04-29 08:01
kangaroo0513 细胞层面呢？检测蛋白？ |
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2017-05-05 09:54
小白同学，你先去看看一篇综述，然后把你的想法计划贴出来。然后再让我们提意见比较好。
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2017-04-29 06:59
在线设计sgRNA，构建质粒(sgRNA cDNA+cas9+mcherry)，脂质体转导，检测荧光信号以证明质粒的进入情况，PCR扩增目的区段，测序。 这是分子层面，想要到细胞层面就不知道怎么办了
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2017-05-01 00:26
那么后续你选择性的做个分选rfp 阳性细胞。可以先做个wb检测蛋白的表达有没有下去.然后再根据你的测序结果判断的移码突变的比例，分单细胞到96 孔板，然后扩大培养，比如，你的移码突变做出来是40%。那么十个扩大培养里面就有四株是ko的。可以再做wb检测。 |
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2017-05-01 23:28
展开引用 sicaujj ...... 然后就有个小问题，如果突变点太小，不影响蛋白表达，或者说WB检测不出，会不会存在这样的可能？ |
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2017-05-02 11:57
柳清扬 所以你该focus在移码突变上。一般来说sgRNA都是target the first exon. |
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2017-05-05 20:02
怎么是focus在移码突变？不太懂，我的感觉就是有蛋白，分选就有信号，WB就有条带，是不是？但是分选没信号就一定是crispr有作用吗？而且这样是在验证其切割效率，只要有切割就能证明它work了吗？
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2017-05-03 10:07
柳清扬 移码突变才是要的结果，这样子才算ko。你的第二句话逻辑我不是很懂。 |
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