【求助】关于RNA提取中的试剂..._RNA提取纯化试剂_核酸提取纯化_分子类_知道

游客	收藏 \| 举报 2011-12-21 20:08 关注：191 回答：3 【求助】关于RNA提取中的试剂... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-12-22 12:05 【求助】关于RNA提取中的试剂

游客	举报 2012-01-02 04:24 rna提取，一般步骤原理都是，先裂解细胞，然后在去蛋白，脂肪，多糖等杂质。氯仿，是一种变性剂可以让蛋白变性达到去除的作用，也是一种增加溶液比重，通过离心，让溶液分层的作用。异丙醇可以容核酸。分层。上清一般为核酸溶液，中间层大多为蛋白，下层就是密度比较大脂肪等的杂质。

游客

举报 2011-12-30 22:19

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我是个初学者，有很多问题。请大家指教。
1、RNA提取为什么用异丙醇，而且是等体积的？
2、为什么用氯仿，RNA为什么在上清中，中间和下层分别有什么？
3、RNA提取最后为什么用75%乙醇洗，而且为什么使用的是75%乙醇而不用无水乙醇来洗。还有有人建议用完75%乙醇后用无水乙醇洗，会使水分快速蒸发，可行吗？
谢谢大家啦，帮帮忙。

......

1.异丙醇是沉淀核酸用的。不一定非得等体积。多点没关系。有机溶剂，跟水互溶，与水结合后，核酸由于不能被电离就沉淀出来了。
2.为何用氯仿有点忘了。中间层是蛋白，下层是有机相应该是DNA。站内搜索一个‘雾都孤儿’的贴，写的很详细，很不错的。
3.用75%乙醇洗是由于RNA中还有很多盐离子，用75%能溶解其中的离子，如果是100%的乙醇，则没啥意义，离子洗不掉，就不叫洗了。用75%的洗了之后用无水的再洗可以加速蒸发。

游客	举报 2011-12-29 17:30 LS正解。 2. 氯仿可是蛋白变性，且比水重，离心后在最下层，里面主要含有蛋白。上层是水相，里面含有RNA和少量的DNA，中间层是DNA。因为RNA和DNA的溶解度不同，因此RNA在上层水相，DNA在中间层

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