【信息】与细胞凋亡有关的检测系统和试剂描述..._细胞裂解和提取物_天然蛋白_蛋白类_知道

细胞凋亡检测系统和试剂应用原理
1、Caspase-GloTM 3/7 是一种均质的生物荧光检测方法，用于测量Caspase-3/7 的活性。试剂盒提供一个前萤光Caspase 3/7-DEVD萤光素底物，这个底物溶解在一种已经为Caspase-3/7 活性、萤光素酶活性和细胞裂解而优化好的试剂中。仅仅加入一个Caspase-GloTM 3/7 试剂，以“加入—混合—测量”方式，就可导致细胞裂解，接着底物被Caspase 切开，在萤光素酶存在时产生“辉光型”生物萤光信号。产生的萤光强度与Caspase-3/7 活性成正比。检测使用一种有专利的稳定萤光素酶，结合专利技术的缓冲体系，在很广范围的检测条件下提高了检测性能，比其它基于生物萤光、化学荧光或比色方法的检测较少受到化合物的干扰。这个检测为多孔板而设计，既可用于纯酶，也可用于细胞培养物。

2、Apo-ONETM 均质 caspase-3/7 检测提供了用均质的方案快速、灵敏地测量活性caspase-3和-7的所有必需试剂。该检测包括一个前荧光caspase-3/7共有底物，即甲叉（N-CBZ-L-天冬酰氨-L-谷氨酰-L-缬氨酰-天冬氨酸酰胺）若丹明110（Z-DEVD-RllO），及经过优化的双功能细胞裂解/活性缓冲液。缓冲液能有效裂解培养的哺乳动物细胞，并支持Caspase-3/7的最佳酶活性。底物和缓冲液混合后就制成均质的caspase-3/7试剂，可直接加入到样品中。一旦caspase-3/7酶切开了底物DEVD肽序列上C-末端一边的天冬氨酸残基后，在498nm波长激发，若丹明110就发荧光。最大发射波长是521nm。所产生的荧光物质的量就代表样品中存在的活性caspase-3/7的量。

3、CaspACETM FITC-VAD-FMK原位标准物是泛caspase抑制物Z-VAD-FMK（卞氧羰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-[O-甲基]-荧光甲基甲酮）的荧光类似物。异硫氰酸荧光素（FITC）基团替代了卞氧羰（Z）N—末端封闭基团而产生荧光凋亡标准物。这种结构使得抑制物可进入细胞，在细胞内抑制物与激活的caspases在原位发生不可逆结合。由于用FITC标记，仅加入一个试剂就可在原位检测caspase的活性。我们提供的FITC-VAD-FMK是溶解在二甲亚砜中的5mM溶液，在原位用荧光检测法检测caspase的活性。在抗-Fas-抗体处理的Jurkat细胞培养物中的建议使用浓度是10μM。

4、试剂盒CaspACETM 检测系统，比色法，提供测量caspase-3的活性的试剂，caspase-3是半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶家族的成员之一，CaspACETM 检测系统提供了一个比色底物和一个可通透细胞的抑制物，高灵敏度地定测量caspase-3（DEVDase）蛋白酶的活性，这个蛋白酶的活性是细胞凋亡过程早期的一个调节因素。

5、试剂盒CaspACETM 检测系统，荧光法，提供检测半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶家族的Caspase-1, 或白细胞介素-1β-转换酶（ICE/CED-3）, 和caspase-3，或CPP32的试剂。这些蛋白酶在哺乳动物炎症和凋亡过程中起关键作用（1-4）。试剂盒CaspACETM 检测系统提供荧光底物和抑制物，对ICE (Caspase-1) 和CPP32 (Caspase-3/DEVDase) 蛋白酶活性进行灵敏度高而且定量地检测。使用试剂盒提供的两个选择性底物和抑制物可区分ICE和CPP32的活性。这个试剂盒既可用于纯酶制剂，也可用于细胞提取物。

6、末端脱氧核苷酸转移酶催化将dNTP重复添加到一个DNA链的3’-OH末端。这个过程伴随着无机磷酸盐的释放（1）。这样，该酶以独特的方法对DNA分子进行末端标记，核苷酸的聚合不依赖于模板。最好以单链DNA做起始物。在反应缓冲液中存在1mMCo+（如CoCl2）可以不同的效率进行任何类型的3’末端加尾。对于双链DNA起始物来说，3’末端突出的加尾最有效。

7、DeadEndTM 比色法TUNEL系统是一个经过改进的系统, 可在单个细胞水平上,简便、准确和快速地原位检测凋亡的细胞。这个系统测量细胞核DNA的断裂情况，细胞核DNA断裂在多种细胞类型中是凋亡的一个很重要的生化指标。该系统既可用于检测组织，也可用于检测培养细胞的凋亡细胞的死亡情况。

8、DeadEndTM 荧光法TUNEL系统是一种特异性检测和定量一个细胞群体中凋亡细胞的经典方法。该系统测量的是在许多细胞类型中成为凋亡的重要生化标志的核DNA断裂情况。该系统应用非放射性方法，简单、准确、快速地原位检测单个细胞或细胞悬液中的凋亡细胞。

9、Death CheckTM I检测系统由CaspACETM 检测系统，比色法（目录号G7351）,和DeadEndTM 比色法TUNEL系统（目录号G7360）两者组成。一般来说，需要用一种以上的方法来证明细胞死亡是由凋亡（程序性细胞死亡）导致。这些系统通过两种方法检测细胞死亡，共同提供有关凋亡的互补信息。CaspACETM 检测系统，比色法，提供检测caspase-3（DEVD酶）活性的试剂，该酶是细胞裂解液中半胱氨酰天冬氨酸特异的蛋白酶家族的成员。DeadEndTM 比色法TUNEL系统提供群体中单个细胞凋亡情况的原位信息。在Death CheckTM I系统中两者结合的检测可用于检测体外细胞群体或原位单个细胞的凋亡情况。
Death CheckTM II检测系统由DeadEndTM 比色法TUNEL系统（目录号G7360）和CellTiter 96TM AQueous 单溶液细胞增殖检测（目录号G3582）组成。这些检测用两种方法监控细胞死亡；共同提供所感兴趣细胞的体外和原位的互补信息。 CellTiter 96TM AQueous 单溶液细胞增殖检测用比色检测法提供一个细胞群体活性的体外信息。Death CheckTM II检测中两种检测的结合可以在精确地评估单个细胞的凋亡情况后理想而快速地评估一个细胞群体的活性丧失情况。
Death CheckTM III检测系统由CellTiter 96TM AQueous 单溶液细胞增殖检测（目录号G3582）和CaspACETM 检测系统，比色法（目录号G7351）两个系统组成。CellTiter 96TM AQueous 单溶液细胞增殖检测用比色检测法提供一个细胞群体活性的体外信息。CaspACETM 检测系统，比色法，提供检测caspase-3（DEVD酶）活性的试剂，该酶是细胞裂解液中半胱氨酰天冬氨酸特异的蛋白酶家族的成员。Death CheckTM III系统中结合的两种检测是快速测量一个细胞群体活性丧失和caspase激活的理想选择。

10、Z-VAD-FMK（苄氧羰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-[O-甲酰]-氟甲基酮）是一种细胞可通透性泛Caspase抑制物，不可逆地结合在Caspase蛋白酶的催化位点，可抑制细胞凋亡的诱导（1-4）。要抑制细胞凋亡，Z-VAD-FMK应在凋亡被诱导时加入。Z-VAD-FMK以20mM溶于二甲亚砜中，便于加入细胞培养物或细胞提取物。该短肽在天冬酰胺的P1位置甲基化，增强了稳定性和细胞通透性。在抗-Fas单克隆抗体处理的Jurkat细胞培养物模型系统中建议的使用浓度是20μM。

11、Ac-DEVD-CHO是Caspase-3/7（DEVDase）活性的抑制物。抑制Caspase活性的抑制物浓度必须根据对每一系统的经验来确定。研究显示，10μM抑制物足够抑制凋亡的THP-1细胞提取物的Caspase活性。

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