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【求助】关于线粒体提蛋白的问题... 已解决
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【求助】关于线粒体提蛋白的问题
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2006-11-16 22:50
裂解液和样品的比例是多少
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2006-11-19 11:37
提出脑线粒体后，从你裂解液的配方看，你是想做双向电泳吧。
上面的配方适合提取线粒体总蛋白，但是要注意几点： 1。加入裂解液后，最好在冰浴中静置10-20分钟，使线粒体膜被充分裂解。 2。最好在加入裂解液后超声，100W，6s，4次，这样可大大增加线粒体内蛋白的释放。但功率不能太大，否则部分蛋白会降解。 3。最好用25000g离心，一般30min-60min内均可。 4。加入裂解液的量，决定你最终的样品液浓度。一般200-400ul就行了。当然，你最好制得样品后立刻定量，再根据你2DE的上样量将蛋白分装保存。 |
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2006-11-27 15:27
我是提线粒体跑2－D
请问是不是次序是这样的：加入裂解液－－然后冰浴10－20分钟－－然后超声－－然后25000g离心，30min-60min。 |
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2006-11-18 04:01
是的。
祝实验顺利。 |
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2006-11-19 18:30
谢谢DIGE!这星期就要进实验室了，很紧张！总担心做不好！谢谢你得帮助！
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2006-11-21 12:18
你好，楼主！我也想买载体两性电解质PH3-10,可是问了几家公司，他们25ml都要三千多元，而且没有分装。
我想请问楼主，你们的是那家公司定的，有分装的吗，大概价格多少。 谢谢！ |
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