新手求助：如何检测该调磷酸酶（calcineurin）的活性..._细胞裂解和提取物_天然蛋白_蛋白类_知道

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游客	收藏 \| 举报 2004-05-17 15:17 关注：235 回答：2 新手求助：如何检测该调磷酸酶（calcineurin）的活性... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-11-24 10:09 新手求助：如何检测该调磷酸酶（calcineurin）的活性

游客	举报 2004-05-17 15:45 我也需要测细胞内调磷酸酶（calcineurin）的活性，不知道你是否已经做完了，麻烦回复一下，万分感谢！

游客

举报 2004-05-23 14:58

您看此法可行不？
用环孢菌素α（抑制NFATc1去磷酸化及核异位，但不抑制基因表达）处理细胞12h，提取胞浆部分裂解液，用NFATc1特异抗体进行免疫沉淀，提取物为a（磷酸化的NFATc1）。提取BPs处理和非处理全细胞裂解液（不用环保菌素α处理），用Calcineurin特异抗体进行免疫沉淀，提取物分别为b和c。取等量b和c分别与等量的a在37℃孵育4h，然后用磷酸化的PKA（蛋白激酶A）底物特异性抗体进行 Western blotting 检测，分析ALN处理组和非处理组磷酸化NFATc1的差异，评价BPs对Calcineurin活性的影响