求重组蛋白表达纯化服务质量好些的公司?国内或者国外进口皆可！..._其它重组蛋白_重组蛋白_蛋白类_知道

游客	收藏 \| 举报 2018-01-14 01:55 关注：222 回答：4 求重组蛋白表达纯化服务质量好些的公司?国内或者国外进口皆可！... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-12-22 09:51 求重组蛋白表达纯化服务质量好些的公司?国内或者国外进口皆可！懂的来！

游客	举报 2018-01-23 21:59 你想知道重组蛋白表达纯化服务质量好些的公司?首先就要确定自己的需求！国内或者国外进口皆可！？看来你不缺钱啊！这个问题问的过于笼统！首先，蛋白表达与纯化包括很多种类型，比如原核蛋白表达，哺乳动物蛋白表达，酵母蛋白表达以及昆虫蛋白表达等等，而现在生物实验中常说的蛋白表达纯化通常是指利用大肠杆菌表达系统的原核蛋白表达，这种表达方式比较简单，普遍都可以做。但是如果是指很多种蛋白表达系统的话，可以做的单位就比较少了。另外，蛋白的表达成功与否还需要取决于蛋白的性质，所以前期一定要问清楚！

游客

举报 2018-01-19 15:20

蛋白表达纯化已经是非常经典简单的实验了。
说说我的蛋白表达纯化以及单抗制作概要吧：

1 首先要知道你要纯化蛋白的编码DNA序列，看目的基因在那些细胞或者组织中高表达，进而设计该基因的引物，扩增出目的DNA片段的ARF。这一布叫目的基因片段的获取

2 构建表达载体：根据你获得的基因本身的特性确定原核或者真核载体中表达，这一步的主要问题就是构建带有目的基因的质粒，导入表达系统中。一般原核表达时间短，成本低，表达量大，常优先考虑；但是有些基因在E coli中就是表达不出，可能是密码子优化等出现问题，也或者是由于想纯化得到更好的活性蛋白的考虑（原核的蛋白折叠系统显然没有真核的好），有很多研究者选择在毕赤酵母中表达。，这一步再强调一下，优化密码子对于蛋白的成功表达很重要

3 载体构建好了，下面就是重组蛋白的表达了。这一过程涉及到用多少的诱导剂，诱导多少时间才能得到最多的蛋白的问题，即优化表达条件。就是在上述不同量诱导剂诱导条件下，取菌体上清（分泌型）或者破碎细胞（胞内表达的蛋白）电泳，看是否得到目的分子量大小的蛋白

4 蛋白表达成功，下面是根据蛋白质本身亲水/疏水，电荷带电特性等确定蛋白纯化的方法。一般步骤：离心，取蛋白所在的相
如果是分泌表达的蛋白，则取上清，超滤，没有超滤仪器可以用透析袋等代替，用离子交换柱层析。基本上这一步能得到纯化的95％的蛋白，电泳鉴定基本不会看到有杂带出现。如果还是纯度不符合要求，可以在表达蛋白最初在构建表达载体质粒的时候在蛋白的ORF后面加上HIS－标签，这样得到的蛋白不但可以用于HIS柱的进一步纯化，在不确定自己的融合蛋白是否有表达的时候，也可以单单用抗HIS的抗体做一WB，分析确认目的蛋白是否表达，这是蛋白表达的常用手段。

5 经过纯化后的蛋白仍然含有一部分无机盐，如果需要的话可以将蛋白经真空冻干机冻干，得到纯蛋白。展开

游客	举报 2018-01-22 06:07 将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。原核蛋白表达系统是迄今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统，能快速表达纯化各种不同来源蛋白。所制备的重组蛋白纯化可用于结构生物学研究、细胞生物学研究、蛋白质组学研究等的一系列研究。根据不同的表达要求，如表达量高低、目标蛋白的活性和表达产物的纯化方法，可选用适当的表达系统及相应的表达策略。

游客	举报 2018-01-16 17:34 重组蛋白表达纯化国内或者国外的来说国外的有些国内的貌似不多哦

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