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【求助】急急急急急！求高手相助，关于使用His标签蛋白纯化抗... 已解决
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- 解决时间 2024-07-05 22:08
【求助】急急急急急！求高手相助，关于使用His标签蛋白纯化抗体！
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2013-06-12 21:34
求好心人指点 啊！！！！！！！！55555555555
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2013-06-07 10:40
T TT T T TT T T T T T T T T TT T T T T TT T T T T T T T T T
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2013-06-12 16:54
展开引用 蜜兜 ...... 好复杂啊，我硬是没看明白！！ GST-Ag免疫，得到的多抗是兔抗-GST-Ag， 然后HIS-Ag去纯化兔抗-GST-Ag， 你想把HIS-Ag挂到Ni柱上，再挂兔抗-GST-Ag，得到兔抗--Ag，排除兔抗-GST，对吗？ 何必这样设计实验呢？而且行不通啊 |
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2013-06-07 08:15
展开引用 loud2008 ...... 是的是的，就是这个意思，我的确没做过抗体相关的东西，在实验室前辈指导下做的，大体的意思就是您说的那个可以直接出去抗GST，因为用GST标签纯化的话要先把抗体过一遍GST蛋白，去掉抗-GST，再拿这个流穿过GST-抗原融合蛋白.....不知道您是怎么做的啊，而且这个为什么不可能啊？是Ni 没法和His交联吗？ |
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2013-06-05 19:18
蜜兜纯化抗体常用的是用溴化氢活化的柱子和你的蛋白交联再用来纯化抗体。 |
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2013-06-13 05:53
reyesa真是非常感谢你，还想请教这个柱子是固定蛋白的原理是什么啊？跟His标签有关系吗？ |
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2013-06-11 03:34
蜜兜 你想做的是经典的抗原亲和纯化。就是用溴化氢的活化柱直接和你的蛋白化学交联。跟his没有关系的 |
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2013-06-11 07:14
reyesa明白了，reyesa ，谢谢你的耐心解释，非常感激：） |
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2013-06-12 00:16
溴化氢的活化Sephrose 4B连接HIS-Ag，与你得到的多抗结合，再洗脱，得到目的抗体。
或者溴化氢的活化Sephrose 4B连接GST，与你的多抗结合，收集流穿，得到目的抗体。 这样的话，实验很难，为什么不在第一步，免疫的时候直接去掉GST啊？ 或者验证一下，你得到的多抗不跟GST反应，不就可以了？ 最好，做单克隆抗体！！ 老板发飙不应该啊，得补课啊 |
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2013-06-09 14:24
展开引用 loud2008 ...... 嗯嗯，谢谢你的指点，表达的时候是GST融合蛋白，用GSTbeads纯化的，你说的去掉GST是怎么操作呀？ |
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