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  • 游客
收藏 | 举报 2017-06-01 10:38   关注：208   回答：9

求助!!!第一次做琼脂糖凝胶电泳...

已解决 悬赏分：0 - 解决时间 2024-10-06 12:30
求助!!!第一次做琼脂糖凝胶电泳

我来回答
  • 游客
举报 2017-06-09 17:36
微光ksm
我用试剂盒提了质粒，想跑琼脂糖凝胶电泳看看质粒的纯度如何，结果Marker很清晰，但是样本一点条带都没有，孔的位置也不亮，做了两次，也加大了上样量，都没有出现条带，求朋友们指点!!!

测浓度了吗？
  • 游客
举报 2017-06-07 23:05
sicaujj

测浓度了吗？

测了，浓度不高，60纳克/微升左右
  • 游客
举报 2017-06-09 05:24
微光ksm

测了，浓度不高，60纳克/微升左右

这个kit提出来是用于测序的吗？浓度太低了，你要想看到条带，至少要上个5ul吧。
  • 游客
举报 2017-06-12 02:20
sicaujj

这个kit提出来是用于测序的吗？浓度太低了，你要想看到条带，至少要上个5ul吧。

我用的是10*loading buffer,样本加了9微升
  • 游客
举报 2017-06-11 01:16

1． 制胶 以制备50ml, 1%凝胶为例，按压取1片低渗琼脂糖，放入50ml缓冲液浸泡203分钟使之完全崩解，之后操作与粉末琼脂糖相同。（注意，不需添加任何染料。）

2．染色 GelRed Loading Buffer与样品按照1:4体积比混合放置3-5分钟。

3． 上样 样品与Marker按常规方法上样。

4． 电泳、成像分析同常规做法。

您可关注公司网址：www.life-ilab.com
  • 游客
举报 2017-06-10 01:03
sicaujj

这个kit提出来是用于测序的吗？浓度太低了，你要想看到条带，至少要上个5ul吧。

又提了一次浓度在160多，A260峰明显，上样量9μl,还是没有条带，真的不知道哪里出了问题，高手能帮忙分析一下吗
  • 游客
举报 2017-06-12 23:51

展开引用

微光ksm

又提了一次浓度在160多，A260峰明显，上样量9μl,还是没有条带，真的不知道哪里出了问题，高手能帮忙分析一下吗

......


做转化后板上的菌长的正常吗？用的什么感受态？什么载体？用的什么kit提质粒的？
  • 游客
举报 2017-06-09 09:04
sicaujj

做转化后板上的菌长的正常吗？用的什么感受态？什么载体？用的什么kit提质粒的？

这个是空白质粒，别人给的菌种，是15年的，摇过夜后用康维世纪小提试剂盒提的，给的人说这次的不是很好，但还是可以跑出条带的
  • 游客
举报 2017-06-02 16:35
微光ksm

这个是空白质粒，别人给的菌种，是15年的，摇过夜后用康维世纪小提试剂盒提的，给的人说这次的不是很好，但还是可以跑出条带的

过夜培养后离心下来的菌量也很少咯？要不划线活化一下。要么把你现在的质粒拿去换一种感受态快转看看。
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