叙述DNA分子杂交的southern blotting的过程..._转膜仪_电压电位_仪器类_知道

一、制备样品DNA
二、限制性内切酶消化样品DNA
三、凝胶电泳分离消化产物
四、如果靶序列>5kb，在0.25M的HCl中进行震荡脱嘌呤10min，ddH2O洗一次
五、用变性液震荡处理30min，ddH2O洗一次
六、中和液震荡处理30min
七、裁取合适大小的尼龙膜或硝酸纤维素膜进行转膜操作，可用真空转膜仪或者搭滤纸桥，需要20×SSC
八、制备探针，可用地高辛标记（以地高辛为例）
九、将膜放入杂交瓶，42°C预杂交30min
十、倒掉预杂交液，加入杂交液，适当的温度进行杂交4h至过夜
十一、洗膜，先用2×SSC+0.1%SDS，20-25°C洗2×5min，再用0.5×SSC+0.1%SDS洗2×15min。然后用washing buffer洗1-5min，接着用blocking solution洗30min后，用antibody solution洗30min，再用washing buffer洗2×15min，再用detection buffer洗2-5min后，取出膜，放于保鲜膜上，在结合有DNA的一面滴加CSPD ready-to-use后，立刻盖上保鲜膜，让CSPD ready-to-use均匀的布满膜表面，室温放置5min后，37°C温育10min以上
十二、放射自显影，可用成像系统信号累积模式显影或用X-ray显影

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