1%tritonx-100的细胞裂解液能不能释放出细胞核内的..._漩涡震荡仪_破碎混匀_仪器类_知道

本品是一种传统的细胞组织快速裂解液。使用本品裂解得到的蛋白样品可以用于常规的
Western、IP 等。主要成分为50mM Tris (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40， 0.1% SDS。
使用本品裂解得到的蛋白样品，可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有
较高浓度的去垢剂，不能用Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
保存条件：4℃
制备细胞裂解产物：
1、800g 4℃离心5 分钟，收集细胞，估计细胞离心后的体积(PCV,106 cells ≈ 20ul PCV,
107 cells ≈ 100 ul PCV)
2、每50~100ul PCV 加入5 倍体积的蛋白裂解液（250~500ul）,冰浴中放置10 分钟，且每隔5
分钟在漩涡混合仪震荡30 秒；
3、12000g 4℃离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；
4、假如所得蛋白产物较为粘稠，可95℃加热5 分钟，然后迅速冰浴5 分钟，12000g 4℃离心
10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。
制备组织裂解产物：
1、取50-100mg 组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS 洗涤2 次，离心弃去PBS；
2、加入0.5-1ml 预冷的蛋白裂解液；
3、4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40 次，直到95%的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10 分钟，且每
隔5 分钟在漩涡混合仪震荡30 秒；
4、12000g 4℃离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
5、假如所得蛋白产物较为粘稠，可95℃加热5 分钟，然后迅速冰浴5 分钟，12000g 4℃离心
10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物。
6、20%的甘油保存于-70℃或-20℃。

全部问答分类

1%tritonx-100的细胞裂解液能不能释放出细胞核内的...