【求助】放射受体分析和液闪仪使用问题..._液闪仪_计数测量_仪器类_知道

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游客	收藏 \| 举报 2008-04-16 16:27 关注：237 回答：1 【求助】放射受体分析和液闪仪使用问题... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-11-21 22:01 【求助】放射受体分析和液闪仪使用问题

游客

举报 2008-04-18 04:31

这样做不是很好
1 binding assay做起来不那么容易，实验中最关键的是放射性配体的浓度和蛋白浓度的比例，他决定了你所得到的数据有无剂量依赖性，需要你做预实验，每次每个剂量要做三副管，之后取均值。
2 30度反应一个小时后，最好还是负压抽滤，之后烘干滤纸，放闪烁液，再计数。
3 你用离心的方法，我没有做过，但给我感觉误差要大，可重复性不是很高。但可以做几次预实验看看。
4 加入闪烁液后可以直接计数，如果数据不稳定，可以放置一段时间再测，我试过，一般数据差距不会很大。
5 我做的是转染后的细胞提取蛋白，蛋白浓度20ug/反应体系，反应体系100ul，同位素10000dpm（相当于1nM)
实验中要注意的事项，如果测得的数值偏高，而且没有梯度，通常都是蛋白浓度过高，同位素的浓度不够。