nanodrop 和紫外分光光度计的区别..._分光光度计_计数测量_仪器类_知道

一、产品应用

ND-2000是目前国内外实验室中使用最为广泛的一款微量分光光度计，其优越的性能、准确的结果赢得了广大用户的好评。

该产品可用于以下几个方面：

* 紫外检测：常规紫外光波长下检测样品吸光值；

* 核酸检测：可检测dsDNA、ssDNA、RNA等不同类型核酸的浓度及其在260nm、280nm处的吸光值；

* 探针检测：检测荧光标记探针的吸光值，可用于去除未能标记探针的样品；

* 细胞培养物检测：检测细胞培养物在600nm处的吸光值；

* 蛋白检测：检测普通纯化后蛋白的浓度和280nm处的吸光值；

* 蛋白标记检测：可检测被BCA、Bradford或Lowry标定的蛋白样品，自动画出标准曲线并计算出待测蛋白质浓度。

二、产品简介
NanoDrop 2000超微量分光光度计是NanoDrop的最新产品，应用液体的表面张力特性，样品体积只需要 0.5~2ul，在检测台上，经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、高浓度、免石英管、免毛细管等耗材检测吸收值的优点。此产品设计受专利保护，并在全世界广受欢迎，其准确度与便利性让科学家得以更有效率进行各项研究。

NanoDrop 2000使用高能量氙灯（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm的全光谱检测，且不需要暖机，开机后立即使用。搭配高感度CCD array检测器，检测吸收值可高达300Abs（dsDNA浓度2~15000ng/ul），大部分纯化后的核酸几乎都不需要稀释即可检测。

待测样品的均质性是NanoDrop 2000的最高要求，一般核酸、蛋白质样品能在检测前以vortex mixer震匀为最佳，若无vortex mixer也应以pipette吸放数次混匀。若担心genomic DNA可能因前述动作而断裂，则改以55?C加热约一分钟，使样品在侦测前呈现均匀状态，以确保 2ul 具有代表性。

检测时选择不同检测模式，可以得到最快速的结果：
● Nucleic Acid ?C 吸收光谱、230nm, 260nm, 280nm吸收值（换算成10mm光径吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸浓度。

● UV-Vis ?C 190~840nm间所有波长的吸收值及光谱（以1mm光径吸收值呈现）。

● A280蛋白质定量法 ?C 280nm吸收值（换算成10mm光径吸收值）、260/280 ratio及蛋白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质，须具有已知的质量消光系数（mass extinction coefficient）方可计算。

● BCA、Bradford及Lowry ?C 依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果，自动画出标准曲线并计算R square，待测蛋白质浓度。

* 蛋白质检测模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三种常见定量呈色剂，因呈色剂随时间会逐渐加深，使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品，在最佳时间内完成检测，以得到良好的标准曲线。每个标准曲线最多可有七个标准品，每个标准品最多可做五重复。

* 测蛋白质时样品体积需使用 2ul，每个样品检测后需以Kimwipes 低尘擦拭纸（编号： 34155 ）擦拭15~20回，以避免呈色剂与蛋白质的残留。

浓度范围：

样品种类

最低浓度

最高浓度

(超过时请稀释样品)

再现性 (五重复以上)

核酸

2 ng/ul

15000 ng/ul (dsDNA)

12000 ng/ul (RNA)

浓度范围在 2-100 ng/ul 时，SD为 ± 2 ng/ul

浓度范围大于 100 ng/ul 时，CV为 ± 2%

纯BSA

0.10 mg/ml

100 mg/ml

浓度范围在 0.05-10 mg/ml 时，SD为 ± 0.10 mg/ml

浓度大于 10 mg/ml 时，CV为 ± 2%

蛋白质，以BCA方式定量

0.2 mg/ml

8.0 mg/ml

CV：± 2% （在可侦测的浓度范围内皆然）

蛋白质，以modified Lowry方式定量

0.2 mg/ml

4.0 mg/ml

CV：± 2% （在可侦测的浓度范围内皆然）

蛋白质，以Bradford方式定量

100 ug/ml

8000 ug/ml

浓度范围在 100-500 ug/ml 时，SD为 ± 25 ug/ml

浓度大于 500 ug/ml 时，CV为 ± 5%

蛋白质，以Mini Bradford方式定量

15 ug/ml

100 ug/ml

浓度范围在 15-50 ug/ml 时，SD为 ± 4 ug/ml

浓度大于 50 ug/ml 时，CV为 ± 5%

三、技术参数：

1、波长范围: 190-840nm；

2、波长精度: 1nm；

3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm)；

4、其它: 1mm光程长度（可自动调整到0.05mm）；

5、检测下限：2ng/μl（dsDNA）；

6、检测上限：15000ng/μl（dsDNA）；

7、吸光率精确度：0.002 absorbance (1mm光程)；

8、吸光率准确性：2%(at 0.76 at 257 nm)；

9、吸光率范围：0.02-300 (相当于10mm光程)；

10、核酸检测周期：< 5s；

11、体积：14cm×20cm。

四、使用方法举例：

dsDNA：在主画面点选Nucleic Acid，计算机与仪器自动完成联机。依照DNA所溶于之液体准备该溶液（务必确认DNA溶于二次水、TE buffer或哪一组kit的elution buffer）取出1.5 ul 点在侦测台上，放下上臂后再按Blank。在右上方拉选Sample Type 选 DNA-50，在Sample ID位置输入样品名称，将样品混匀，取出1.5 ul 点在侦测台上，放下上臂后再按Measure。

五、结果整理：

NanoDrop2000 软件在侦测一开始会询问档案欲存至何处，若未指定，则档案会存在上一个使用者的档案内。

六、注意事项：

1. 侦测后立即使用拭镜纸（Kimwipe类）擦拭台面。先取一张将上下台面的液体吸走，再将此laboratory wipe吸过样品的面反折到内部，折迭四次后以单方向多次擦拭台面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。

2. 同一滴液体只能做一次侦测，欲重复定量同一样品，请擦掉前一滴，重新取出一滴进行侦测。

3. 基本上核酸样品可使用1~2ul做测量，随各液体体积特性之不同会有不同体积需求，原则上不超过 2ul。并请使用2ul pipette避免体积不足导致液柱无法完整形成。唯蛋白质样品因呈色剂与蛋白质本身特性，务必使用2ul进行侦测。

4. 当软件跳出错误讯息时，请详细阅读并依指示进行障碍排除。最常发生的情形是在侦测过程液柱并未正确形成，软件会出现以下讯息。可先用肉眼观察液柱是否未完整连接上下台面，或样品内有泡泡，将上臂拉起后，擦掉该滴样品，再重新进行侦测，必要时可将样品体积加大至2ul。

5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之腐蚀样品，其它无腐蚀性之液体皆可使用。
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