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收藏 | 举报 2017-10-05 01:01   关注:265   回答:1

流式细胞仪测定细胞周期各时相的原理和基本步骤(不用说具体使用...

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流式细胞仪测定细胞周期各时相的原理和基本步骤(不用说具体使用的量)

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  • 游客
举报 2017-10-07 21:59
在细胞培养液中加入模拟核苷酸EdU (比较老的方法也可以用BrdU)。培养一小时 后,更换为正常的培养液继续培养。模拟核苷酸可以像天然核苷酸一样被细胞摄取并整合入新合成的DNA。
培养一段时间后(一般小于一个细胞周期),固定细胞。根据所使用模拟核苷酸的不同,使用不同的方法。EdU,改变缓冲液的pH值,就会发出荧光。而BrdU则需用荧光抗体识别,需要对细胞膜和核膜进行通透处理。
再加入PI对DNA染色。
在二维坐标图上,横坐标设为线性PI荧光强度,纵坐标设为模拟核苷酸的荧光强度(log)。
典型的图就像下面一样:
G1, G2 和S期就按照图中的划分来做。G1期的细胞没有新合成DNA,所以BrdU信号是阴性,而PI的信号位于1倍体期。S期是正在合成DNA,所以BrdU都是阳性。G2期是已经合成好了2倍的DNA,所以位于2倍体期,信号是G1期的一倍。这个图中,G1 PI信号是300, G2就是600.