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2010-03-05 04:33
电转时是要尽量避免带进去离子的,否则商家也不用把化学转化和电转化的感受态细胞分开出售了,呵呵!至于DH5a肯定是不行的,我想最根本的原因应该是其中不含有重组酶,这样你就是做一年也不会发生重组的。其实做分子生物学实验一定要对原理清楚。你的经验教训确实可以避免新手犯错误。呵呵!
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2010-03-06 14:02
还有一个问题就是我用PacI 处理重组腺病毒质粒时得到的片段基本上都是4.5kb,3kb片段的几率小于15%。难不成都是在ori位点发生同源重组的?
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2010-03-05 16:32
事实就是如此,绝大部分都是左、右臂重组,切下来的小片段是4.5kb;只有不到10%的是复制起始点与右臂的重组,切下来的小片段是3kb。
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2010-03-12 13:46
请看我的图,BamHI消化重组病毒质粒pEasy-1/gene。左1到左4均为阳性病毒重组克隆,以前鉴定过:PacI 可切出4.5 kb片段;PCR结果亦表明有目的基因插入。左5和左6为对照质粒pAdTrack-CMV 和pAdEasy-1的BamHI 消化结果。我的问题是:
1)转染293 cells后有荧光没病毒。用转染10d后的细胞裂解物无法感染新的293细胞。 2)从图上看,BamHI消化后的阳性病毒重组质粒(左1到左4)怎么比对照质粒pAdEasy-1(左5)还小?两条带都小于对照... |
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2010-03-15 23:35
如今又商品化的腺病毒backbone质粒pAdEasy-1已转化至BJ5183 Ecoli菌株中,只是有点小贵而已!!
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2010-03-12 10:58
请问这样的慢病毒和逆转录病毒的使用时不是很严格啊?普通的实验室怕是不能做吧?
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2010-03-05 21:29
学习了。。。
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2010-03-09 04:22
。。。。。。电转的秘诀是离子越少越好,楼主该多看看基础的东西,磨刀不误砍柴功。
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2010-03-09 19:01
完全是超级菜鸟嘛……
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2010-03-12 11:30
"完全是超级菜鸟嘛……"
别吹了! |
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