求克隆基因启动子的方法..._克隆基因_克隆和表达_分子类_知道

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游客	收藏 \| 举报 2004-11-18 10:35 关注：228 回答：4 求克隆基因启动子的方法... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-09-22 06:58 求克隆基因启动子的方法

游客	举报 2004-11-26 09:55 有高手帮一下吗? 斑竹帮忙顶一下,我很焦急.

游客

举报 2004-11-21 13:11

方法有两个，

一个是用常规的PCR方法来调序列。如果你知道改基因的序列，可以通过查找改基因的上有序列。通常在基因转录起始点的上有，如果你对基因的表达不清楚，先坐RACE来确定5UTR序列，让后上游序列大概200－1000KB是基因启动子，先用软件分析是否有产规的转录因子结合位点，然后可以克隆后分析是否有启动子活性。

如果你不知道全序列，用genomic walking 的方法，可以购买试剂合，从已知序列设计下游引物，向上游walking. 上游引物是已知的，具体原理是用平端酶切基因组DNA，然后用平端连接引物（已知），连接构成不同大小的DNA模板库，这样两端的引物是知道的，而你的基因序列也是知道的，可以在基因上面设计引物（两个）来扩增。具体方法如果游问题再问。开始前要好好读通说明书，否则很难拿到正确结果的。

游客	举报 2004-11-27 09:13 水稻的基因组已经全测序，找到该序列，然后分析前面的序列，PCR扩增出启动子就行了。如果不确定，可以扩增基因前面不同长度的序列，然后看看启动基因的功能。