• 游客
收藏 | 举报 2017-11-07 11:14   关注:208   回答:1

请教高手:克隆基因的步骤...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-12-22 11:55
请教高手:克隆基因的步骤

我来回答
  • 游客
举报 2017-11-18 06:20
选择目基,并设计相应引物;
用引物PCR扩增目基片段;
选择合适(抗性标记、酶切位点等)克隆载体(保真扩增),并PCR片段连接入克隆载体;(般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连)
连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增;
肠杆菌提取质粒(即前面连接产物),酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.