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研究蛋白质相互作用的技术平台-酵母双杂交系统... 已解决
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研究蛋白质相互作用的技术平台-酵母双杂交系统
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2003-07-25 23:25
非常好!
请多多开展关于酵母的话题,谢谢 |
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2003-07-23 18:05
酵母双杂交系统(yeast two hybridization)在蛋白质相互作用中的应用. 酵母双杂交系统, 又称为蛋白阱捕获系统, 是90 年代兴起的一种研究蛋白质相互作用的高新分子生物学技术, 由Fields 等人首先创建并应用. 酵母的半乳糖酐酶基因的转录因子GAL4蛋白, 由881个氨基酸残基构成, 分为DNA结合区(DNA binding domain)和转录激活区(activation domain). 将编码拟研究的靶蛋白(prey)的基因与编码转录激活区的序列结合形成一个融合体, 将编码另一蛋白 诱饵蛋白(bait)的基因与编码DNA结合区的序列融合形成另一杂合体. 当这两个杂合体在同一酵母中表达时, 只有prey 和bait相互作用时才可以使GAL4的DNA结合区和转录激活区结合在一起, 形成一个完整的有活性转录因子, 从而激活报告基因, 酵母才能在选择性培育基中表现出应有的表型 生长或抑制. Gibcobrl的酵母双杂交系统采用了MaV203菌株, 其表型为：MATa, leu2-3, 112, trp1-901, his3D 200, ade2-101, galD , gal80D , SPAL10：：lacZ, HIS3UAS GAL1：：HIS@LYS2, canR, cyh2R. 该系统共有3个报告基因: HIS3, lacZ, URA3. 当bait-prey相互作用时, 以上报告基因表达, 酵母可以在缺His平板上生长, 使X-gal变蓝, 而同时由于启动了URA3系统, 其将培育基中的5FOA转化为5FU, 使阳性菌落的生长受到抑制. 通过该系统的筛选, 可以使酵母双杂交的假阳性率显著降低. 该技术已广泛应用于信号传导、蛋白功能研究、癌基因研究、细胞凋亡研究等领域。
目前已发展形成了酵母三杂交系统. 它不仅应用于验证已知蛋白的相互作用, 亦可以自酵母双杂交文库中寻找与诱饵蛋白相互作用的新蛋白质, 从而发现新基因. |
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2003-07-23 04:58
很受启发，谢谢！
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2003-07-25 07:47
研究蛋白质之间的相互作用还可用免疫共沉来研究
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2003-07-25 11:26
有没有重庆的朋友在做y2h的？一起交流一下可以不？
没有办法啊，老板非要拿十几万出来让我做这个东东，我也只好硬着头皮顶上去了。 |
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2003-07-29 05:09
请问一下各位，一般构建好的酵母文库中包含有多少个外源基因？或者说某个基因对应的酵母克隆数大概有多少个？
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2003-07-25 09:21
各位做过酵母双杂交的朋友，请问哪家公司可以买到酵母双杂交系统？价格相对实惠点的 |
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