【求助】求推荐靠谱的人唾液DNA保存运输及提取试剂盒..._DNA文库制备试剂盒_二代测序_分子类_知道

游客	收藏 \| 举报 2016-06-21 22:45 关注：230 回答：5 【求助】求推荐靠谱的人唾液DNA保存运输及提取试剂盒... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-11-24 07:41 【求助】求推荐靠谱的人唾液DNA保存运输及提取试剂盒

游客	举报 2016-06-22 03:57 楼主这个问题容易解决，经费有限的话可以用常州百代生物的BIOG唾液DNA提取试剂盒，50次的才300多块钱，有配套的保存液可长期保存样本，每人份十几块钱吧，很多第三方检测中心都在用的，包括迪安诊断。这个试剂盒虽然是国产的，但是操作简便，耗时少，我提取的DNA做PCR的CT值在23左右，适合下游的基因检测，另外完整性也比较好，基因测序和基因分型应该也没问题。楼主可以试一下。

游客	举报 2016-06-28 11:47 我用过一款BIOG唾液DNA提取试剂盒，有配套的保存液可长期保存样本。操作很方便，我提取的DNA做PCR的CT值在23左右。价格也不贵，五十次反应三百出头，性价比非常高。

游客

举报 2016-06-28 18:54

各位战友好，因实验要求需要提取人的唾液DNA，但因标本需要在临床采集，无法做到当天就提取DNA，因此天根等漱口水提DNA的试剂盒都不满足实验需求。

之前一直在用艾德莱的唾液DNA保存运输提取试剂盒，但是这段时间下来感觉提取效率太低，而且特别不稳定，经常50%以上的标本都提不出来DNA，或者浓度特别低，完全崩溃的感觉！

我们是艾德莱生物的，偶然看到了这个帖子，觉得有些事实必须澄清一下。我们基本是国内最早做唾液DNA保存提取的公司，最早就是替换加拿大DNAgenotek的同类产品开发的。一直使用良好，替换了进口的公司产品，客户反馈良好，客户包括前北大生科院长饶毅的实验室，和一些业内知名的二代测序公司。你说你是我们用户，那你使用不好应该和我们沟通过啊？但是实际上我们根本没有联系过你，也没有来找我们的，你到底是哪个公司的，或者哪个学校的？我们从来没有人和你沟通这个售后的技术问题？我希望你用证据确定一下是我们的客户，而不是竞争对手故意抹黑我们公司的。

第二，就我们这边的数据，我们曾经反复跟踪1-9个月，每个月都提取监测了一下提取DNA的效果，都非常好，二代测序公司一次性的都定过上万份的样品，而且每次生产都是一大桶一大批的保存液，至于提取DNA的试剂，而且这个唾液DNA提取配套的提取试剂是全血DNA提取试剂盒，这个也是至少10升一桶，我们一直在销售，一直在自己使用提取的。根本不会有问题。如果你真是觉得这一批有问题，按照常理你可以选择联系我们，我们给你技术支持，售后更换一个批次帮你找原因也很简单啊，这不是很简单的事情么？但是你怎么偏偏不按照常理出牌，完全不联系我们，却要选择自己独自做实验就是不问厂家，不寻求厂家帮助，宁可崩溃了也不联系我们，然后选择在网上说我们呢？

第三，从技术角度来说，这个保存提取试剂都是一瓶子里面的溶液，完全一样的，完全一样的东西，你说你只能提取50%，那你说是啥问题？一个瓶子里面的试剂是完全一样的，你有的提取得出来，有的提取不出来，那说明问题在哪里？说明问题根不在试剂，因为试剂一个瓶子里面完全一样的，不一样的就是你的样品的差异，和操作的稳定性一致性的差异啊。一个杯子里面的糖水要甜一杯子都是甜的，要不甜一杯子都是不甜的，怎么可能和你说的喝一口是甜的，再喝一口说是苦的，再喝一口又是甜的，再喝一口又是苦的？

清者自清，相信大家有正确的判断。

最后，我们摆出更多的资料，这个配套提取试剂，加拿大genotek推荐的就是用Qiagen的血液DNA提取试剂盒来提取。对应我们的艾德莱的血液DNA提取试剂盒(溶液型），这个试剂盒已经销售10年以上了。非常成熟问题，我们自己也天天用它来提取血液DNA的。一批至少是10升，几百个盒子。要有问题，我们早就会知道，要没有问题，我们自己天天用得，卖得当然也能知道。

www.aidlab.cn核酸纯化，我们有十几年的经验，各种发表文章，和特殊的独家的试剂盒保持业内领先。

懂行的人看看就明白了，比如提取超大型的200kb的质粒DNA，提取复杂植物microRNA，骨组织RNA提取的，植物RNA提取发布文章130多篇了。就是这个唾液DNA提取得，也是我们独家的。

希望你看到了后回复， 328153626QQ

游客

举报 2016-06-29 14:28

北京艾德莱小量/中量/大量全血基因组DNA提取试剂盒（溶液型）简介

更适合大量血液DNA提取，如1-20ml血液提取，和大量样本量提取

产品原理

简单的Puregene流程应用经修饰的高盐沉淀法纯化DNA，无需蛋白酶K消化，并且确保手工操作时间最小化。流程提供方便的实验终止点，可暂时保存部分纯化的样品，安全可靠。

产品介绍：

本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

外国主流公司如Qiagen、Promega、Roche完全是使用蛋白沉淀的原理来消除蛋白质，速度更快，纯度更高。我们完全掌握，就连名字，操作，成分，说明书也完全和国外公司通用。

详情看见艾德莱生物网站：www.aidlab.cn

产品特点：

1、采取和世界著名品牌Qiagen、Promega、Roche相同的原理和配方研制而成，操作步骤和简洁性完全一致。质量完全替代进口。

2、核心技术和国际主流方式完全接轨，不需要使用蛋白酶K，不需要使用有毒的苯酚等试剂。

3、从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或缩小每次处理的全血量（20μl~20ml）。

4、快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

5、结果稳定，产量高（典型的产量3ml全血可提取出75-150μg），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

6、纯化的大分子DNA可在 -20°C 条件下（推荐-80°C更佳）长时间保存10年以上而不出现降解。适用于遗传学研究、生物库和临床试验等有些应用需要长期保存样品信息。

服务优势：

我公司的技术支持都是具有海外背景的生命科学相关专业博士，可及时解决客户遇到的问题，也可到现场做讲解、演示或指导。国外巨头完全无法做到现场的专业技术支持。

大量用户案例

1、北京协和医院实验室

凭借北京第一个研发出和qiagen，roche ，proemga完全原理，配方，说明书一致的大量全血基因组DNA提取的技术人员和多年积累的深厚技术功底，艾德莱生物的全血DNA提取技术在全血DNA提取市场上攻城掠地，进入各大医院，经过严格测试和艾德莱生物技术人员现场现场技术演示，艾德莱生物优质的大量全血基因组DNA提取试剂盒又一次获得著名协和医院的青睐，产品优异的各项指标例如操作简捷性，时间，纯度，产量以及价格的综合优势，击败同时竞争的包括Qiagen等多家国内外公司一举获得大单。首批订单，为7000人份血液，总血液处理量达到40000毫升。客户表示，昂贵的国外产品价格要比艾德莱的价格高5倍以上，而质量一致。经过测试，艾德莱产品完全可以达到甚至超过质量要求。没有理由不选择优质的国产艾德莱生物产品。同时艾德莱的技术支持的本土响应沟通速度和研发技术人员的亲自上场指导演示，那是只把中国当做销售市场，没有本土研发技术人员的国外巨头无法复制的优势。

2、北京回龙观医院中心实验室

客户已经用了4年该产品，总用量最少有20000ml血液处理量。

3、西安交通大学分子遗传所

客户已经反复大量使用了5年该产品，总用量至少50000ml血液处理量。

还有解放军总医院、北医三院、北大医院、人民医院、同仁医院、北京基因组研究中心、湖南湘雅医院、西安交通大学、湖南师范大学生命科学院……

注意：以上必要时候均可以提供详细科室，地址，使用者姓名，联系电话。

游客

举报 2016-06-27 18:36

附录：艾德莱说明书和Qiagen同类产品说明书（完全原理方法成分一致，可通用）

艾德莱说明书操作步骤及要点：

1.吸取9ml 1x红细胞裂解液到一个15ml离心管。

使用前应该用去离子水将10x红细胞裂解液稀释10倍到1x。

2.将抗凝全血（使用前回复到室温）颠倒混匀后，吸取3ml加到上步装有红细胞裂解液离心管中，颠倒6-8次，并倒置轻弹管壁，确保充分混匀。室温放置5－10分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。

3.2,000 x g离心2分钟，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清（注意不要吸到管底的细胞团），留下完整的管底白细胞团和大约100μl的残留上清。

4.涡旋振荡直到白细胞团充分重悬、分散。

5.加入3ml细胞核裂解液到重悬的白细胞，吹打混匀，或者剧烈涡旋10秒充分混匀。

6.可选步骤: 在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至终浓度30μg/ml，颠倒25次混匀，37℃温育15分钟去除残留RNA，然后冷却回室温。

7.加入1ml蛋白沉淀液后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀20秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。

8.2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心5分钟。这时候应该可以见到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

9.小心吸取上清（大约3ml）到一个新的15ml离心管中。

10.加入等体积的室温异丙醇（3ml），轻柔颠倒30次混匀或者直到出现棉絮状（丝状）白色DNA沉淀。

11.2,000 x g离心3分钟，在管底可以见到白色的DNA沉淀块，倒弃上清。

12.加入3ml 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA沉淀，2,000 x g离心1分钟, 倒去上清（沉淀很松，注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。

13.加入250μlDNA溶解液重新水化溶解DNA沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60分钟（不要超过一小时），也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA，中间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。

14.DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

Qiagen公司的全血DNA提取说明书

（我们的原理方法和Qiagen完全一样，都是直接翻译过来的）

Procedure

1. Dispense ■900 μl, ▲9 ml, or ●30 ml RBC Lysis Solution into a ■1.5 mlmicrocentrifuge tube, ▲15 ml centrifuge tube, or ●50 ml centrifuge tube.

2. Add ■300 μl, ▲3 ml, or ●10 ml whole blood or bone marrow, and mix byinverting 10 times.

3. Incubate ■1 min, ▲5 min, or ●5 min at room temperature (15–25°C). Invert atleast once during the incubation.

■For fresh blood (collected within 1 h before starting the protocol), increase incubationtime to 3 min to ensure complete red blood cell lysis.

4. Centrifuge for ■20 s at 13,000–16,000 x g, ▲2 min at 2000 x g, or ●2 min at2000 x g to pellet the white blood cells.

5. Carefully discard the supernatant by pipetting or pouring, leaving approximately■10 μl, ▲200 μl, or ●200 μl of the residual liquid and the white blood cell pellet.

6. Vortex the tube vigorously to resuspend the pellet in the residual liquid.

Vortexing greatly facilitates cell lysis in the next step.The pellet should be completely dispersed after vortexing.

7. Add ■300 μl, ▲3 ml, or ●10 ml Cell Lysis Solution, and pipet up and down tolyse the cells or vortex vigorously for 10 s.

Usually no incubation is required; however, if cell clumps are visible, incubate at37°C until the solution is homogeneous.

Samples are stable in Cell Lysis Solution for at least 2 years at room temperature.

8. Optional: If RNA-free DNA is required, add ■1.5 μl, ▲15 μl, or ●50 μl RNaseA Solution, and mix by inverting 25 times. Incubate for 15 min at 37°C. Thenincubate for ■1 min, ▲3 min, or ●3 min on ice to quickly cool the sample.

9. Add ■100 μl, ▲1 ml, or ●3.33 ml Protein Precipitation Solution, and vortexvigorously for 20 s at high speed.

10. Centrifuge for ■1 min at 13,000–16,000 x g, ▲5 min at 2000 x g, or ●5 minat 2000 x g.

The precipitated proteins should form a tight, dark brown pellet. If the protein pelletis not tight, incubate on ice for 5 min and repeat the centrifugation.

11. Pipet ■300 μl isopropanol into a clean 1.5 ml tube, ▲3 ml isopropanol into aclean 15 ml tube, or ●10 ml isopropanol into a clean 50 ml tube and add thesupernatant from the previous step by pouring carefully.

Be sure the protein pellet is not dislodged during pouring.

12. Mix by inverting gently 50 times until the DNA is visible as threads or a clump.

13. Centrifuge for ■1 min at 13,000–16,000 x g, ▲3 min at 2000 x g, or ●3 minat 2000 x g.

The DNA may be visible as a small white pellet.

14. Carefully discard the supernatant, and drain the tube by inverting on a clean pieceof absorbent paper, taking care that the pellet remains in the tube.

15. Add ■300 μl, ▲3 ml, or ●10 ml of 70% ethanol and invert several times to washthe DNA pellet.

16. Centrifuge for ■1 min at 13,000–16,000 x g, ▲1 min at 2000 x g, or ●1 minat 2000 x g.

17. Carefully discard the supernatant. Drain the tube on a clean piece of absorbentpaper, taking care that the pellet remains in the tube. Air dry the pellet for ■5 s,▲1 min, or ●10–15 min.

The pellet might be loose and easily dislodged.

Avoid over-drying the DNA pellet, as the DNA will be difficult to dissolve.

18. Add ■100 μl, ▲250 μl, or ●1 ml DNA Hydration Solution and vortex for 5 s at

medium speed to mix.

19. Incubate at 65°C for ■5 min, ▲1 h, or ●1 h to dissolve the DNA.

20. Incubate at room temperature overnight with gentle shaking. Ensure tube cap istightly closed to avoid leakage. Samples can then be centrifuged briefly andtransferred to a storage tube.

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