• 游客
收藏 | 举报 2017-05-30 12:14   关注:246   回答:16

又出新问题……WB转膜后marker不见了……...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-11-22 04:55
又出新问题……WB转膜后marker不见了……

我来回答
  • 游客
举报 2017-05-31 13:34

第三张没有的话肯定是反了,至于第二个感觉像是抗体没有孵育均匀

  • 游客
举报 2017-06-03 15:46
dxy_tekrnub6

第三张没有的话肯定是反了,至于第二个感觉像是抗体没有孵育均匀


没有放反啊 最近做了三次都是这样 刚才转了20min 35 40 55kd的marker条带也都不见了,但是70kd的条带还在
  • 游客
举报 2017-06-07 14:50
喵呜33

没有放反啊 最近做了三次都是这样 刚才转了20min 35 40 55kd的marker条带也都不见了,但是70kd的条带还在

换一只新的marker吧,用久了就是没有才买的亮,话说你加的多少体积来着?
  • 游客
举报 2017-05-30 22:51
dxy_tekrnub6

换一只新的marker吧,用久了就是没有才买的亮,话说你加的多少体积来着?

marker是这个学期刚开的一支…加的5μl…
  • 游客
举报 2017-06-04 09:06
喵呜33

marker是这个学期刚开的一支…加的5μl…

新的我加3ul都很亮了,电转液配方是啥?用的什么牌子的膜?
  • 游客
举报 2017-06-05 09:07

展开引用

喵呜33
最近做的三次WB,用的试剂都一样,条件都一样,转膜是300mA 40min,分子量是40kd和45kd。三次结果如下:第一次,转膜后Marker 正常,最后显影条带正常。第二次,转膜后marker不见了,最后显影条带如图,一张膜呈现一头大一头小的条带,另一张膜结果正常。第三次,转膜后还是没有marker,显影后条带上什么都没有求帮忙分析同样的条件同一瓶母液,为什么会这个样子呢……心里急得很……

......


加样量不一致
  • 游客
举报 2017-06-08 10:41
dxy_tekrnub6

新的我加3ul都很亮了,电转液配方是啥?用的什么牌子的膜?

配方:10X转移缓冲液

甘氨酸29.8g

Tris(mw121.13)58g

SDS3.7g

(加一定的水溶解后,测PH8.0,最后定容至1L)

使用的时候10X转移缓冲液100ml加水定容至800ml后,加200ml甲醇。

膜是Millipore的pvdf膜 0.45μm的

  • 游客
举报 2017-06-01 21:57
昆仑散人

加样量不一致

都是做过蛋白定量的
  • 游客
举报 2017-06-07 08:13

展开引用

喵呜33

配方:10X转移缓冲液

甘氨酸29.8g

Tris(mw121.13)58g

SDS3.7g

(加一定的水溶解后,测PH8.0,最后定容至1L)

使用的时候10X转移缓冲液100ml加水定容至800ml后,加200ml甲醇。

膜是Millipore的pvdf膜 0.45μm的

......


电转液最好现配现用吧,绕后不回收,不过我以前用10层感觉也没遇到这个问题
  • 游客
举报 2017-05-30 18:29
dxy_tekrnub6

电转液最好现配现用吧,绕后不回收,不过我以前用10层感觉也没遇到这个问题

不加sds效果感觉好些
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