求助分裂泛素酵母双杂载体Split..._载体_其他分子产品_分子类_知道

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游客	收藏 \| 举报 2017-11-06 16:16 关注：175 回答：1 求助分裂泛素酵母双杂载体Split... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-09-30 21:28 求助分裂泛素酵母双杂载体Split

游客

举报 2017-11-07 08:35

酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多，二是转化效率偏低。所谓假阳性就是：在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下，报告基因被激活。主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用，或者这种融合蛋白的激活作用被外来蛋白激活。另外AD融合靶蛋白如果有DNA的特异性结合，则也可单独激活报告基因的表达。因此，为排除假阳性就需要作严格的对照试验。应对诱饵和靶蛋白分别作单独激活报告基因的鉴定。目前几个公司推出的酵母双杂系统都采用了多个报告基因，且每个报告基因的上游调控区各不相同，这可减少大量的假阳性。另外，报告基因通常整合到染色体上，可以使基因表达水平稳定，消除了由于质粒拷贝数变化引起基因表达水平波动而造成的假阳性。