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2017-11-11 05:07
所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的,已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定,前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子,将几个可能与致病力相关的基因做了敲除,通过致病力筛选,做了会更好,但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect;3)同框缺失即完整的使原基因敲除掉、胞外多糖分泌测定、比对获得全基因之后。第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大、致病性测定等等,所谓的敲除不外乎有三种情况,不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的,如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系。通过敲除来研究基因的功能,现在正在构建互补载体;2)抗性基因双交换替换掉原基因做黄单胞,在通过Tn5构建转化子库之后:1)单交换插入抗性基因使原基因失活、Tail-PCR获得侧翼序列、生长曲线
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