pet28构建表达载体发生自连？..._载体_其他分子产品_分子类_知道

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游客	收藏 \| 举报 2017-08-03 13:57 关注：216 回答：10 pet28构建表达载体发生自连？... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-11-22 08:58 pet28构建表达载体发生自连？

游客	举报 2017-08-10 21:01 How is the 240 bp insert DNA generated?

游客	举报 2017-08-12 06:02 刘昊QC8B 构建后双酶切验证，发现载体变的超大5000多变成了8000以上，切出来的片段也不对，我的是240bp的切出来1000多，还特别暗。大家有遇到这个问题么？电泳marker右边第一个是对照空载体。你可以用载体的通用引物做菌液pcr，不需要做酶切

游客	举报 2017-08-06 12:15 mpark How is the 240 bp insert DNA generated? 是用pcr出来的，设计的双酶切引物，pcr后试剂盒纯化然后双酶切，试剂盒纯化，然后t4连接酶连接。

游客	举报 2017-08-10 21:04 徐鹏程2QTW 你可以用载体的通用引物做菌液pcr，不需要做酶切我是用的自己引物菌液pcr都出来了，然后去测序不对然后提质粒验证了一下，不对。

游客	举报 2017-08-14 09:55 The 420 bp PCR fragment can be blunt ended and then using blunt ending ligation to clone into pUC or pBlueScript first. After screening and sequencing confirmation, cut off the insert and clone into pET28.

游客

举报 2017-08-09 04:40

mpark
The 420 bp PCR fragment can be blunt ended and then using blunt ending ligation to clone into pUC or pBlueScript first. After screening and sequencing confirmation, cut off the insert and clone into pET28.

thank you 我今天做了新的酶切并且用切之前的做了对照发现pet28b切之后的大小变得很大得8000以上而对照是5000多正常的，是不是我酶切的问题啊？

游客	举报 2017-08-10 21:25 Many things can happen. Redo the cloning and clone the 420 bp PCR product in blunt ending ligation.

游客	举报 2017-08-11 02:22 mpark Many things can happen. Redo the cloning and clone the 420 bp PCR product in blunt ending ligation. OK我试试

游客	举报 2017-08-14 23:07 谢邀，不过实验室的东西真不太懂。。主要还是做一些数据处理、画图之类的工作；

游客	举报 2017-08-10 06:41 最后说一下结果，双酶切切出来的质粒跑电泳就是很大，正常连接就好了，我最后用的bamh1和ecor1已经成功四个了