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2009-02-19 10:40
GST蛋白纯化得率低，我觉得一般问题不会出现核酸什么的上。
就我做过的纯化，我觉得有几个注意点：一是蛋白本身，最好不是包含体形式表达，要不然上清中本来蛋白就少。二是结合有两种方式，一是过柱子，二是将微珠和上清在4度混匀一小时，再自填装，效果要好很多很多，吸附更好。三是谷胱甘肽洗脱时，ph特别重要，需要在ph8.0时，谷胱甘肽活性才最好，最后一步最容易忽略，我建议你检查是否谷胱甘肽将蛋白完全洗脱下来了。 |
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2009-02-20 09:37
这个问题我考虑过，但是请问如何检测蛋白是否完全洗脱下来哪？
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2009-02-23 08:22
最后如果是用NaOH清洗柱子，可以看看清洗液里有没有
如果是自装柱，可以吸点点微珠加loading煮沸，跑page考染了再看 |
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2009-02-21 04:56
谢谢!
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