细胞代谢组学的样品怎么准备？..._细胞代谢_细胞研究_细胞相关_知道

游客	收藏 \| 举报 2015-04-17 15:04 关注：216 回答：10 细胞代谢组学的样品怎么准备？... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-12-22 11:27 细胞代谢组学的样品怎么准备？

游客	举报 2015-04-26 06:12 我也想知道

游客	举报 2015-04-18 08:44 55555有人知道吗

游客

举报 2015-04-19 15:47

细胞及培养液样本收集参考步骤
本方法适用于细胞代谢组学测试LC/MS & GC/MS
一、实验准备：
1、玻璃试管 (配瓶盖)：1 支/每样品
2、样品瓶 (配瓶盖)：2 支/每样品（1 支装培养液，1 支装细胞破碎离心后上清液）
3、15 ml 离心管：2 支/每细胞状态差的样品（1 支装培养液，1 支装PBS 洗液）
4、1.5 ml 离心管：1 支/每样品（培养液取样用，如果培养液不需要做检测，可以不用）
5、2.0ml 离心管
二、细胞破碎及代谢物提取：
1. 从培养箱中取出培养皿，显微镜下观察细胞状态。
(1) 细胞状态不差；
(2) 细胞状态差，有较多悬浮，贴壁不牢。
2.收集贴壁不牢的细胞：
(1) 1 ml 移液枪调至750 μL 取1.5 ml 培养液于EP 管中，剩余培养液丢弃（如果培养液不
做代谢组检测的话，此步可以省去）；
(2) 用原培养液吹打细胞，把贴壁不牢的细胞全部吹打下来，收集全部培养液于15 ml 离
心管，离心，取出1.5 ml 培养液于EP 管中，剩余培养液丢弃（如果培养液不做代谢组检测
的话，离心后可以全部丢弃），保留离心得到的细胞（管1）。
3. 收集贴壁牢的细胞：
(1) PBS 冲洗细胞，洗去残留在皿中培养液：一次1 ml，洗6 次，至肉眼无色。洗液保留
到另一离心管（管2），离心，保留细胞；
(2) 加1 ml PBS 溶液到皿里，散布均匀，用细胞刮刀刮下细胞，向同一位置刮，吸取细胞
悬液到玻璃离心管（管3）；另取0.5 ml PBS 溶液到皿里，冲洗残余细胞，尽量全部吸取到离
心管中，得到1.5 ml 细胞悬液于玻璃试管（管3）中。
(3) 用管3 中的1.5 ml 细胞悬浊液，将管1 和管2 中的细胞团汇总到管3 中。
(4) 混合液移入2ml 离心管，离心，保留细胞。‐80℃冻存，干冰寄送。
三、细胞量要求
细胞量：10^7 ，一次不够，可将多次合并，必须保证足够的量！
如有疏漏，欢迎指正！

游客	举报 2015-04-27 11:04 请问楼主液氮淬灭的具体方法之后得到解决了吗？也麻烦不吝赐教

游客	举报 2015-04-28 04:30 有用酶解法准备样品的protocol么

游客	举报 2015-04-26 15:22 请问楼主处理好的衍生化样品最多可以在-80℃保存多久？

游客	举报 2015-04-27 13:16 认领本文翻译，48小时内未完成，请其他战友认领！

游客

举报 2015-04-19 17:23

编译共1095字
脂肪细胞之新陈代谢研究或可产生针对糖尿病和肥胖症的新疗法
通过理解我们体内的脂肪细胞如何利用营养物质的分子生物学知识，我们实可所知颇多。举例而言，上述知识可揭示为何那些具有糖尿病和肥胖症的人会具有脂肪细胞新陈代谢方面的问题，这些知识也有助于开发针对上述人群的症状的新型疗法。
现在，一项来自加州大学圣迭戈分校发表于《自然化学生物学》杂志的新近研究提供了脂肪细胞利用哪种营养物质来制造脂肪酸的最新线索。
本文的通讯作者，加州大学圣迭戈分校雅各布工程学院的生物工程学教授Christian Metallo说到，对于细胞如何利用生物化学路径的更好理解可带来治疗诸如癌症和糖尿病的新疗法。
在他们的研究中，该团队展示了随着脂肪细胞的发育，它们用于生长、制造脂肪和能量供应的营养物质种类在不断变化。
上述团队研究了脂肪细胞从完全分化为脂肪细胞之前到完全成为成熟的脂肪细胞整个过程的新陈代谢。
研究人员们发现在分化的早期阶段-此时脂肪细胞仍处在未成熟的前脂肪细胞阶段，这种细胞优选葡萄糖作为它们生长和能量供应的营养物质。
但是随着脂肪细胞的成熟，它们开始不止利用葡萄糖这种单糖，还利用一系列叫做支链氨基酸复杂的分子。此类分子是对人体生长和健康必须氨基酸的一部分。
研究人员还发现成熟的脂肪细胞表现为倾向于部分利用必需氨基酸而不是只用糖类来生产脂肪酸。
在分子层面理解糖尿病和肥胖症。
此项研究之所以重要是因为具有糖尿病和肥胖症的人群的血液中往往具有更高水平的支链氨基酸，而这可能是上述人群的脂肪细胞的分解所致。
本文的一作，正为生物工程博士学位而奋斗的Courtney Green说道，本项研究在理解为何具有糖尿病和肥胖症的人群会表征出更高水平的支链氨基酸这一事实上迈出了一步，并且他补充道：
下一步将会是理解如何以及为何位于此类人群体内的脂肪细胞中的此种新陈代谢途径受到了损坏。
该团队使用细胞培养的方法来实现他们的实验观测。他们用含有碳-13同位素的营养物质培养细胞-这是一项用于追踪在动物和人体研究中历经不同新陈代谢发硬的分子的实验技术手段。
使用这项技术，该团队能够得出细胞利用哪些营养物质进行新陈代谢并指导细胞在不同的分化阶段-从未成熟的前脂肪细胞阶段到完全成熟的脂肪细胞阶段，产生了哪些产物。
Metallo 教授总结道：
本研究的重点在于我们人类体内的不同组织如何利用不同的营养物质。通过分子层面对脂肪细胞新陈代谢的理解，我们为进一步研究以发现治疗肥胖症和糖尿病的更好药物靶点打下了基础。
上个月，今日医学新闻网获悉另一项生物学研究，它揭示了一种关于身体对锻炼的不同响应的新颖机制。其中的一项新发现认为耐力性训练可促进新血管的生长从而提升耐力，并且还不止于此的是，耐力性训练也促进了肌肉的生长。

游客	举报 2015-04-17 17:22 本篇新闻稿主要是讲一项针对脂肪细胞的研究，脂肪细胞的代谢研究对于糖尿病和肥胖症患者而言很重要。本文中所涉及的研究成果主要是关于不同时期的脂肪细胞利用营养物质的差异，从单糖-葡萄糖到支链氨基酸，脂肪细胞在成长分化过程中所利用的营养物质在发生变化，实验手段只要是通过碳13示踪法来检测不同的物质的代谢路径。

游客	举报 2015-04-18 02:57 欢迎试用###################### 版主libertad留言: 请不要不要在论坛里做相关宣传

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