【求助】求小鼠睾丸支持细胞分离经验..._细胞分离_细胞研究_细胞相关_知道

游客	收藏 \| 举报 2013-08-20 21:11 关注：205 回答：10 【求助】求小鼠睾丸支持细胞分离经验... 已解决悬赏分：0 - 解决时间 2024-12-22 00:05 【求助】求小鼠睾丸支持细胞分离经验

游客	举报 2013-08-31 02:43 今天培养48小时，终于看到贴壁的了，只不过数量少，也算是有点欣慰了。

游客	举报 2013-08-29 07:52 我也打算做支持细胞、、用买的细胞株做怎样、、会不会对实验结果有影响、、、求大虾指点啊、、

游客	举报 2013-08-21 13:58 我是自己分的呢，买的就不需要鉴定了，后续实验有待跟进

游客	举报 2013-08-25 05:33 我也在做这个实验，有许多想请教的，我的qq352514121,希望各位大师能够帮我一下，谢了版主cheff0412留言: 请不要公开个人联系方式，建议私下PM

游客	举报 2013-08-27 12:08 消化时间有点长了，观察消化时有细线状的曲精细管游离出来，再过五分钟就差不多了。我觉得最多30分钟，我一般20几分钟，也许支持细胞少，但损伤小，容易存活贴壁。希望有用。

游客

举报 2013-08-28 06:09

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各位前辈，我现在要分离小鼠睾丸支持细胞进行培养，但是做了三次都没有贴壁，不知道问题出在哪，**指导！！！
我的步骤：
1、16－22天小鼠颈椎脱臼法处死后，75%酒精浸泡30秒消毒，睾丸取出后置预冷PBS，40分钟（路上所需时间）后开始处理。
2、剔除白膜，剪碎睾丸。0.25%胰酶（含edta）1.5ml/个睾丸37°C消化30-50分钟，等体积DMEM/F12含10%FBS终止消化，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。
3、加0.1%胶原酶消化30分钟，过200目网筛，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。
4、DMEM/F12含10%FBS 5ml重悬后转如培养瓶，入孵育箱37°C 5%CO2培养。
请教各位，我到底是哪里有问题，是胰酶消化的时间长了吗？

......

请问你后来原代SC细胞做的怎样？我最近做了大鼠Sertoli的分离，第一代长的很好，传代后贴壁性变差，少量贴壁的培养5天也未见增殖，可否帮忙分析下原因，顺便看下细胞形态（第一张图为原代细胞，第二张为第二代生长2d的形态）是否正确。多谢

游客	举报 2013-09-01 05:12 你分的是支持细胞的形态，要做鉴定的，我是用的FASL鉴定的。这种自己分离的细胞最多养一个月就不行了。

游客	举报 2013-08-25 02:29 我也在做小鼠睾丸支持细胞分离培养，感觉你应该是消化的时间太久了，支持细胞中还有其他的生精细胞怎么去除？

游客	举报 2013-08-21 12:06 展开引用 ziqixiaoying 请问你后来原代SC细胞做的怎样？我最近做了大鼠Sertoli的分离，第一代长的很好，传代后贴壁性变差，少量贴壁的培养5天也未见增殖，可否帮忙分析下原因，顺便看下细胞形态（第一张图为原代细胞，第二张为第二代生长2d的形态）是否正确。多谢 ...... 你的分离步骤是怎么做的？我现在正在做,求指教，谢谢

游客	举报 2013-08-28 02:32 zlh514559404 我也打算做支持细胞、、用买的细胞株做怎样、、会不会对实验结果有影响、、、求大虾指点啊、、你的支持细胞在哪买的呢？

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